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| 1 | 猪流产嗜性衣原体omp-1基因噬菌体疫苗免疫效果评价显示文摘本试验对猪流产嗜性衣原体omp-1基因噬菌体DNA疫苗进行了免疫效果评价。将猪流产嗜性衣原体omp-1基因插入λNM1149噬菌体载体构建成DNA疫苗,筛选获得阳性噬斑;使用重组的噬菌体疫苗按250 ng/只分别在第2、16和30天三次免疫Balb/c小鼠,以1B弱毒活疫苗(10μg/只)、噬菌体空载体(250 ng/只)为对照组。免疫后分别以ELISA法测定小鼠抗体以及MTT法检测淋巴细胞刺激指数。结果表明重组λ-MOMP噬菌体疫苗虽然未能在短期内(免疫第29天)激发高水平的抗体(1B组免疫第29天抗体D450=0.347,重组噬菌体组免疫第29天抗体D450=0.19;1B组免疫第43天抗体D450=1.12,重组噬菌体组免疫第43天抗体D450=0.38),但能诱导抗体水平逐渐升高(重组噬菌体组免疫前D450=0.086,免疫第29天抗体D450=0.19,免疫第43天抗体D450=0.38),而且显著性诱导T淋巴细胞的增殖(1B组免疫第29天SI=11.67,重组噬菌体组免疫第29天SI=15.8)。相反弱毒疫苗1B株能激发高水平的抗体,但细胞增殖指数显著低于噬菌体疫苗(1B组免疫第29天细胞增殖指数SI=11.67,重组噬菌体组免疫第29天细胞增殖指数SI=15.8)。试验显示λNM1149噬菌体载体具有潜在增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫效果。 | 刘伟 张畅 张发明 李应超 杨君敬 凌勇 袁吉磊 何诚 | 2008 | 中国农业大学学报2008，13，4： | 4 |
| 2 | 禽鹦鹉热嗜性衣原体PmpD基因N端区的克隆与表达显示文摘为探讨禽鹦鹉热嗜性衣原体PmpD基因的生物学功能,本实验根据禽类鹦鹉热嗜性衣原体Cal-10株全基因序列设计引物,用PCR法扩增禽嗜性衣原体PmpD基因N端区,将特异性目的基因片段克隆入PBS-TII载体,经测序后确认为目的基因,并提交GenBank。试验扩增的禽鹦鹉热嗜性衣原体Cal株PmpD基因与禽鹦鹉热衣原体6BC株的PmpD基因和氨基酸序列的相似性均达99%,与流产衣原体成员嗜流产衣原体S26/3株、嗜豚鼠衣原体(GPIC)、嗜猫衣原体(Fe/C-56)核苷酸相似性分别为89%、82%和77%。PmpD基因N端区基因亚克隆到pET-32a(+)载体上,重组表达载体转化BL21(DE3)表达宿主菌,以IPTG诱导该重组菌,结果表达了约63 ku大小的融合蛋白;分别用禽鹦鹉热嗜性衣原体多克隆抗体、猪、羊流产嗜性衣原体多克隆抗体与表达出的重组蛋白进行Western blotting检测,结果表明该蛋白与禽源衣原体多克隆抗体呈阳性反应,与猪、羊源衣原体多克隆抗体呈阴性反应,显示该重组蛋白具有种属特异性。本研究首次表达了禽类鹦鹉热嗜性衣原体PmpD基因的N端区的重组蛋白,为进一步研究其生物学功能提供依据。 | 袁吉磊 何诚 蒋毅 凌勇 杨君敬 张发明 李应超 陈曦 | 2010 | 中国农业大学学报2010，15，1： | 1 |
| 3 | 流产嗜性衣原体1B株pomp18基因β折叠区的克隆与表达显示文摘为探索POMP18蛋白的生物学功能、揭示其在流产衣原体病诊断和防治中的作用,本试验依据流产嗜性衣原体S26/3株全基因序列设计引物,用PCR法扩增流产衣原体pomp18基因β折叠区,将特异性扩增片段克隆入pMD18-T载体,测序比较分析序列后确认为目的基因,提交GenBank(Accession EU326104)。与GenBank中流产嗜性衣原体S26/3株的pomp18基因和氨基酸序列的相似性均达99%,与其他各型衣原体代表株的相似性为79%~80%。将pomp18基因β折叠区亚克隆到pET-32a(+)表达载体上,重组表达载体转化BL21(DE3)表达宿主菌,以IPTG诱导该重组菌,结果显示该重组菌表达了59 kD大小的融合蛋白;用羊流产嗜性衣原体多克隆抗体对表达的重组蛋白进行Western blotting试验,结果显示该重组蛋白具有免疫原性。本研究首次克隆、表达了流产衣原体pomp18基因β折叠区,原核表达获得了59 kD重组蛋白,为进一步探讨其生物学功能奠定基础。 | 杨君敬 凌勇 何诚 秦秀慧 栗绍文 袁吉磊 | 2009 | 中国农业大学学报2009，14，1： | 0 |
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