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| 1 | 兰州熊蜂(Bombus lantschouensis)SMPD基因原核表达诱导条件的优化显示文摘兰州熊蜂(Bombus lantschouensis)是我国优良熊蜂蜂种,已成功实现人工饲养并应用于设施作物授粉。鞘磷脂磷酸二酯酶(SMPD)是一种水解酶,参与鞘磷脂代谢过程并起关键作用。本研究从诱导温度、IPTG浓度及诱导时间三个因素对SMPD基因的原核表达进行优化,以期获得最佳原核表达条件。结果表明:诱导温度与诱导时间是影响SMPD蛋白表达量的主要因素,而诱导剂IPTG浓度影响较小。当温度为10℃,IPTG终浓度为0.1 mM,诱导时间为32 h时,目的蛋白表达量高,特异性好,能够满足该蛋白后续纯化实验要求。本研究结果为进一步开展SMPD蛋白功能研究奠定重要基础。 | 韩蕾 董捷 黄家兴 和绍禹 吴杰 | 2017 | 中国蜂业2017，68，1： | 1 |
| 2 | 彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用显示文摘目的建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用,为建立新的生殖保护方法奠定基础。方法通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导入超排获得的小鼠卵子,分别于48h和72h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况。结果彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24h可见少量DNA泳出,48h可见大量DNA泳出;通过显微注射导入siRNA48h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异。结论靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法。 | 张仁礼 孟锦绣 闻安民 黄跃深 周灿权 王凯 贾磊 刘彩霞 邓新燕 陈系古 | 2009 | 南方医科大学学报2009，29，11： | 0 |
| 3 | RNA干扰沉默酸性鞘磷脂酶1基因对人成纤维细胞凋亡的影响显示文摘目的为研发保护女性生殖细胞的小分子干扰RNA(siRNA)类药物,以人包皮成纤维细胞(HFF)为模型,检测靶向凋亡关键基因酸性鞘磷脂酶1(SMPD1)基因的siRNA对HFF凋亡的抑制作用。方法设计合成三对靶向SMPD1基因的siRNA并体外转染HFF细胞,转染后48 h用丝裂霉素(MMC)诱导细胞凋亡。荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Q-RT-PCR)法及免疫印迹(Western blot)检测siRNA转染后SMPD1在mRNA水平和蛋白水平的变化,Annexin Ⅴ -PI双染检测细胞凋亡率。用脂质体(lipofectamine 2000)和无干扰siRNA(NT siRNA)作为对照。结果 siRNA1、 2 、 3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为(67. 0±9.0)%、0%、(45.0±2.1)%,以siRNA1最高,蛋白水平的抑制也呈现相同变化。siRNA1组细胞凋亡率为15.2%,明显低于 MMC组(26. 3%)。结论靶向SMPD1的siRNA可以抑制人包皮成纤维细胞凋亡。 | 高军 马芸 张仁礼 刘彩霞 周灿权 | 2009 | 生殖医学杂志2009，18，1： | 0 |
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