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| 1 | 三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用显示文摘背景与目的:shRNA技术是近来发展的热点技术之一,但普遍采用的单位点shRNA干扰载体效果并不理想。本研究探讨三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用。方法:构建外源基因DsRed全长载体转染HEK293细胞。针对报告基因DsRed设计4个干扰载体,一个含有3段shRNA,另外3个分别含有此3段中1段shRNA。转染293/DsRed,荧光显微镜观察基因DsRed。应用实时定量PCR(Real-timePCR)和流式细胞仪(FACS)检测4个载体对DsRed基因在mRNA及蛋白水平干扰效应。结果:4个载体对靶基因DsRed在mRNA及蛋白水平均有干扰效应,且含有3段shRNA载体对DsRed基因干扰效率为(89±16)%,显著高于3个只含有1段shRNA载体[(50±23)%,(52±15)%,(55±27)%],差异有显著性(P<0.05)。结论:三位点shRNA干扰载体可以提高对靶基因的干扰效率。 | 翁艳洁 翁丹卉 夏曦 宋晓红 卢运萍 王世宣 马丁 王常玉 | 2008 | 中国癌症杂志2008，18，4： | 5 |
| 2 | AKT2通过调控p27表达逆转卵巢癌顺铂耐药显示文摘目的:探讨上皮性卵巢癌中蛋白激酶B beta(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 2,AKT2)与p27在卵巢癌多细胞球体顺铂耐药中的作用。方法:三维培养获得人卵巢癌多细胞球体(multi-cellular spheroids,MCS);Western印迹法分析p27及AKT2表达;构建AKT2干扰载体,脂质体法转染A2780细胞后三维培养形成多细胞球体,不同浓度顺铂处理后通过FCM法检测细胞凋亡,MTT法比较细胞对顺铂的敏感性。结果:Western印迹法结果提示,MCS中AKT2及p27的表达高于单层细胞;转染AKT2干扰载体(shRNA-AKT2)的MCS中AKT2、p27表达量较未转染MCS及转染空载体的MCS明显降低。流式细胞仪分解结果表示,不同浓度顺铂作用后,MCS凋亡率明显低于单层细胞;转染shRNA-AKT2的细胞球凋亡率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。MTT法示瞬时转染shRNA-AKT2的细胞球顺铂对细胞抑制率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。结论:干扰AKT2可降低p27的表达,从而逆转卵巢癌对顺铂的化疗耐药。 | 项涛 夏曦 卢运萍 马丁 | 2008 | 肿瘤2008，28，6： | 2 |
| 3 | 腹膜间皮细胞和卵巢癌细胞A2780的相互作用及对顺铂敏感性的变化显示文摘【目的】探讨卵巢癌细胞A2780与卵巢癌患者的腹膜间皮细胞(HPMC)非接触共培养前后Akt2基因水平改变及对顺铂敏感性的变化。【方法】原代培养卵巢癌患者的HPMC与卵巢癌细胞A2780非接触性共同培养24h,观察细胞形态学变化,收集细胞后,分剐利用半定量Real-timePCR法、Westernblot法测定细胞共培养前后Akt2基因在mR—NA和蛋白水平表达的改变,MTT法检测共培养前后对不同浓度顺铂敏感性的变化。【结果】非接触性共培养后,Akt2mRNA水平表达显著增加(P〈0.05);总Akt2蛋白培养前后比较无差异(P〉0.05),磷酸化Akt(p-Akt)蛋白明显上调(P〈0.05);不同浓度顺铂作用后,共培养细胞的存活率升高(P〈O.01)。【结论】HPMC与卵巢癌细胞A2780相互作用可产生促进肿瘤生长的调控因子,引起p-Akt的活化,产生耐药,二者间可能存在着复杂的调控网络。 | 翁艳洁 石英 鲍引娣 周文娟 王鸿雁 王常玉 | 2011 | 医学临床研究2011，28，4： | 0 |
| 4 | 细胞和个体水平沉默效应的差异显示文摘[目的]研究3种不同长度的四联shRNA载体及其在细胞与个体水平的沉默效应差异。[方法]以EGFP为靶标基因,用hU6、mU6、h7SK、hH1 4种启动子,构建21、27、29 bp的3种四联沉默载体,通过转染Vero细胞和注射小鼠肌肉,以实时荧光定量PCR的方法检测绿色荧光蛋白基因的mRNA水平。[结果]3种载体都有很强的沉默效应,其在细胞水平上的沉默效应远高于个体水平上,可以通过未成年鼠的肌肉注射进行转基因。[结论]多位点串联表达shRNA是一种可以达到较好干扰效果的方法,肌肉注射将是一个简便的转基因途径。 | 郑新民 刘中华 程妮 肖红卫 乔宪凤 毕延震 | 2011 | 安徽农业科学2011，39，29： | 0 |
| 5 | 细胞和个体水平沉默效应的差异(英文)显示文摘[目的]研究3种不同长度的四联shRNA载体及其在细胞与个体水平的沉默效应差异。[方法]以EGFP为靶标基因,用hU6、mU6、h7SK、hH14种启动子,构建21、27、29bp的3种四联沉默载体,通过转染Vero细胞和注射小鼠肌肉,以实时荧光定量PCR的方法检测绿色荧光蛋白基因的mRNA水平。[结果]3种载体都有很强的沉默效应;其在细胞水平上的沉默效应远高于个体水平上;可以通过未成年鼠的肌肉注射进行转基因。[结论]多位点串联表达shRNA是一种可以达到较好干扰效果的方法;肌肉注射将是一个简便的转基因途径。 | 郑新民 刘中华 程妮 肖红卫 乔宪凤 毕延震 | 2011 | Agricultural Science & Technology2011，12，8： | 0 |
| 6 | 三位点GSK3β shRNA真核表达质粒的构建及鉴定显示文摘目的构建三位点干扰GSK3β基因的高效shRNA表达质粒载体。方法用DNA重组技术将针对人GSK3β基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pshRNA-U3中,构建shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β。脂质体介导转染人卵巢癌细胞株OV2008,流式细胞仪检测转染效率。运用实时定量PCR和Westernblot分别检测RNA水平和蛋白水平GSK3β的干扰效果。运用流式细胞仪检测紫杉醇诱导的凋亡率。结果经测序证实成功构建携带3个GSK3βshRNA的表达载体pshRNA-U3/GSK3β。RT-PCR和Westernblotting均证实重组质粒pshRNA-U3/GSK3β转染OV2008后可明显降低细胞内GSK3βmRNA丰度及GSK3β蛋白表达。FACS显示,干扰GSK3β可抵抗紫杉醇诱导的凋亡。结论成功构建了针对GSK3β的三位点shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β,并进行了初步的功能效应验证,为进一步研究GSK3β蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。 | 宋晓红 翁丹卉 邢辉 卢运萍 马丁 王世宣 | 2010 | 肿瘤防治研究2010，37，5： | 0 |
| 7 | 两种方法研究不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰效应显示文摘目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。 | 肖红卫 刘中华 刘西梅 郑新民 乔宪凤 李莉 | 2010 | 江西农业学报2010，22，10： | 0 |
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