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| 1 | 肿瘤靶向腺相关病毒携带干扰素β和TRAIL对A549肺癌移植瘤的增强治疗效应(英文)显示文摘干扰素β(IFN-β)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是有效抗癌药物。腺相关病毒(AAV)为目前最有应用前景的基因转移载体之一。利用AAV携带IFN-β和TRAIL基因并置于hTERT启动子控制下分别构建成肿瘤靶向病毒AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL,且单个IFN-β或TRAIL基因治疗发挥了一定的抗癌效果。将AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL进行联合,旨在研究其对A549肺癌细胞体内外的生长抑制效应。ELISA法检测了AAV-hTERT-IFN-β感染A549细胞后分泌型IFN-β的表达;MTT法检测AAV-hTERT-IFN-β联合AAV-hTERT-TRAIL对肿瘤细胞的生长抑制作用;凋亡细胞染色和流式细胞仪分别检测了AAV-hTERT-IFN-β、AAV-hTERT-TRAIL及其联合对A549细胞的凋亡效应;进一步评价了联合AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL对A549裸鼠移植瘤的抑癌效果。结果显示,联合治疗优于任一单独治疗并且导致了增强的肿瘤细胞毒性和凋亡诱导效应。更进一步显示,联合AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL治疗发挥了重要的抑制裸鼠移植瘤效果甚至消除全部移植瘤,为探究IFN-β和TRAIL联合抗癌的分子机制奠定了基础。 | 王毅刚 何凌峰 何国清 孔彦平 刘旭平 蔡海波 刘新垣 谭文松 | 2010 | 生物工程学报2010，26，6： | 6 |
| 2 | 肿瘤的基因治疗:重新燃起的希望显示文摘近年来,基因治疗取得了令人瞩目的进步,世界顶级权威杂志《Science》评出的2009十大科学突破,其中位列第七的就是基因治疗,这为我们征服肿瘤以及其他遗传性疾病带来了新的希望。本文拟从基因治疗发展历程的角度,以大量例证演绎基因治疗的辉煌与跌宕,归纳肿瘤基因治疗的成就与障碍,展望肿瘤基因治疗的发展和应用前景。 | 苏长青 | 2010 | 临床肿瘤学杂志2010，15，7： | 5 |
| 3 | 重组复制型溶瘤腺病毒p53的质量控制方法显示文摘建立重组复制型溶瘤腺病毒p53(SG600-P53)的质控检测方法与质量标准。采用限制性内切酶酶切、PCR法对端粒酶启动子、低压缺氧调控元件融合的巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子、p53基因等重组病毒载体结构进行分析,鉴定结果均与理论值相符。经紫外吸收法(A260)检测,病毒颗粒数为2.0×1011 VP.mL-1;TCID50法测定感染活性为5.0×1010 IU.mL-1。p53蛋白ELISA检测结果表明,重组病毒体外感染人肺癌细胞H1299后,感染组核蛋白和空白对照组A450吸收度之比为5.2。该基因治疗制剂对人肺癌细胞A549体外杀伤的MOIIC50为1.0。以相同MOI感染并经TCID50法检测,重组病毒在人肺癌细胞A549与人表皮成纤维二倍体细胞BJ的增殖比值为398。经阴离子高效液相色谱分析,病毒载体颗粒纯度为99.5%。定量PCR检测表明在1×107 VP的病毒颗粒中,野生型腺病毒基因片段少于1个拷贝。本研究建立的重组复制型溶瘤腺病毒的质量标准与检测方法,可用于该制品的质量控制,同时也为其他溶瘤基因治疗病毒载体质控研究提供参考。 | 高凯 毕华 丁有学 李永红 韩春梅 郭莹 饶春明 | 2011 | 药学学报2011，46，12： | 4 |
| 4 | hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC靶向抗肝癌及旁观者效应机制的研究显示文摘目的观察人端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷(hTERT-TK/GCV)联合hTERT-胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)对肝癌细胞株HepG2生长及凋亡的靶向杀伤效应。方法细胞培养,构建pGL3-hTERT-CD质粒,hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC同时转染HepG2细胞和正常肝细胞L-02,用噻唑蓝(MTT)法观察药物浓度对肝癌细胞存活率的影响,用DNA缺口末端标记法(TUNEL)观察自杀基因对肝癌细胞生长和凋亡的影响,以及对旁观者效应的观察。结果MTT法显示hTERT启动子驱动下两自杀基因体系可以协同表达于肝癌细胞,当GCV为20μg/ml,5-FC为200μg/ml时,对HepG2细胞的杀伤作用达到最大。TUNEL法显示在肝癌细胞中,自杀基因一被启动子高效表达,产生凋亡小体和明显的细胞凋亡率,转染正常肝细胞无此现象。结论hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC基因体系能够靶向杀伤肝癌细胞,存在明显的旁观者效应,弥补了基因治疗转染效率不高的问题,便于指导今后的实验和研究。 | 刘京龙 邓志华 杨长青 刘燕 贾静 郭淑雅 | 2009 | 中国药物与临床2009，9，2： | 2 |
| 5 | 单重靶向条件复制型腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K的构建及鉴定显示文摘目的:构建并鉴定一种新型E1A基因CR2区选择性缺失的腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K,为包装单重靶向条件复制型腺病毒进行肿瘤基因治疗奠定基础。方法:采用RT-PCR法从人胚肾细胞(293T)中扩增条件复制型腺病毒必需的E1区基因,包括E1A、E1Bp及E1B55K基因片段;重叠PCR法扩增CR2区缺失的E1A基因;采用基因重组技术构建pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K重组质粒,并进行PCR及酶切鉴定。结果:经测序证实获得的E1B55K及CR2区缺失的E1A基因与GenBank公布的完全一致,E1A基因CR2区缺失的pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K质粒经分别经XbaⅠ与KpnⅠ单酶切,得到大小约为817和1244bp的酶切片段,PCR鉴定得到约250及1148bp的基因片段,鉴定结果与预期结果完全一致。结论:E1A基因CR2区选择性缺失的单重靶向条件复制型腺穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K构建成功。 | 王宏芳 李金华 刘扬 李艳博 王志成 刘威武 龚守良 | 2010 | 吉林大学学报(医学版)2010，36，5： | 2 |
| 6 | hTERT启动子调控的CXCR4-shRNA逆转录病毒抑制膀胱癌细胞侵袭、增殖的体外研究显示文摘目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的短发夹RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,并研究其对hTERT阳性膀胱癌细胞中CXCR4表达的抑制效应及对细胞侵袭、增殖的影响。方法用PCR扩增特异CXCR4-shRNA的DNA片段,以hTERT启动子代替U6启动子,将重组基因片段导入到逆转录病毒载体,收获病毒后分别感染膀胱癌细胞BIU87及人胚肺成纤维细胞MRC5和人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR、Westernblot检测CXCR4mRNA及蛋白的表达。MTT法检测细胞增殖变化。Transwell小室实验检测细胞体外侵袭能力的变化。结果hTERTpro-CXCR4-shRNA能显著抑制MCF7、BIU87细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达,48hmRNA抑制率分别为(87.09±7.60)%、(91.02±11.32)%,48h蛋白抑制率分别为(89.01±4.87)%、(90.42±9.64)%,其对MRC5细胞不抑制。感染重组病毒的膀胱癌细胞体外侵袭、增殖能力均显著下降。结论重组病毒中hTERT启动子调控的下游RNA干扰序列可靶向表达于hTERT阳性膀胱癌细胞、乳腺癌细胞,不表达于hTERT阴性MRC5细胞。 | 杜岳峰 龙清志 樊桂玲 梁亮 | 2009 | 现代泌尿外科杂志2009，14，4： | 1 |
| 7 | 表达Apoptin基因抗肿瘤双特异性重组腺病毒的构建及鉴定显示文摘为研发一种安全、特异、高效的抗肿瘤基因治疗候选药物,本试验基于人端粒酶启动子(hTERTp)、人5型腺病毒复制必需基因(E1a)和特异性抑癌基因(Apoption),利用RAPAd.Ⅰ腺病毒载体系统,构建了一种具有肿瘤特异性杀伤和特异性复制能力的双特异性抗肿瘤重组腺病毒Ad-VT。并利用人肝癌细胞(HepG-2)、人肺癌细胞(A549)、人宫颈癌细胞(Hela)、人胚胎肺细胞(WI-38)和非洲绿猿肾细胞(Vero)对hTERTp的肿瘤特异性进行鉴定。结果显示,hTERTp可在HepG-2、A549和Hela等肿瘤细胞内特异性启动外源基因的表达,而在WI-38、Vero等正常细胞内不能启动相关基因表达。用RT-PCR及Western-blot等方法对Apoptin基因和E1a基因的转录和表达进行了鉴定。结果表明,Ad-VT能够有效表达Apoptin和E1a等外源基因。 | 王卓越 李霄 王浩然 阚式绂 王宇航 齐延新 吴娜 刘燕瑜 金宁一 | 2011 | 中国兽医学报2011，31，11： | 1 |
| 8 | 肿瘤特异性溶瘤腺病毒载体的构建及其在肿瘤细胞中特异性的表达显示文摘为构建一种由人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控的能够在肿瘤细胞中特异性增殖的新型肿瘤基因治疗溶瘤腺病毒载体系统,利用基因重组技术将hTERTp插入5型腺病毒E1A基因上游,构建肿瘤特异性增殖腺病毒AdSU,使其携带绿色荧光蛋白报告基因.同时构建增殖缺陷型腺病毒Ad-EGFP作为对照.通过Westernblot分析表明该特异性增殖腺病毒AdSU-EGFP在肿瘤细胞中特异性表达EIA.而通过荧光显微镜观察两者增殖实验发现,AdSU-EGFP在正常成纤维细胞株BJ及原代子宫成纤维细胞中无增殖,在肝癌细胞株MH-CC和肺癌细胞株A549中,则可见病毒增殖并裂解细胞的现象.由此可认为成功构建了肿瘤基因治疗的特异性溶瘤腺病毒载体系统AdSU,该系统能够在肿瘤细胞中特异性增殖并表达所携带的外源基因,这对肿瘤的定向基因治疗有着重要意义. | 浦颖艳 方琳 沈权 孙丽君 胡小翠 王艳 曹祥荣 苏长青 | 2008 | 南京师大学报(自然科学版)2008，31，2： | 0 |
| 9 | 调节功能相互抑制的基因表达产物比值测定在相关疾病中的意义显示文摘 | 刘春艳 王礼文 | 2008 | 临床检验杂志2008，26，6： | 0 |
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