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| 1 | 人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备显示文摘目的:利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素(canstatin)重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法:PCR法扩增canstatin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAd5-CMV中,获得穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin.用PacI酶单独酶切穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7~10d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果:测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒(病毒滴度为2.0×1015pt/L).结论:成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础. | 齐宗利 李慧瑾 王东阳 赵俊丽 边晔 冯真真 蒋羽清 郑晓晶 夏海滨 | 2008 | 第四军医大学学报2008，29，18： | 3 |
| 2 | Imaging techniques used for the real-time assessment of angiogenesis in digestive cancers显示文摘Angiogenesis has a critical role in primary tumor growth and the development of metastases.Several angiogenesis inhibitors were recently developed,being a very attractive target for digestive tumor therapy.However,individualized therapy should not only be based on the pre-treatment imaging evaluation,but also on sensitive monitoring of microvascular changes during treatment.State-of-theart imaging techniques have the potential to visualize and characterize angiogenesis,although the technology and methodologies employed are recent and need further validation.The aim of this series of reviews was to analyze and enhance current knowledge and future perspectives about the real-time assessment of angiogenesis in digestive cancers,used for the longitudinal monitoring of the effects of chemo-radiotherapy(including anti-angiogenic therapies),as well as for the precise targeting of drugs through molecular-based drug-delivery systems. | Adrian Sǎftoiu Peter Vilmann | 2011 | World Journal of Gastroenterology2011，17，1： | 0 |
| 3 | RGD修饰携带tumstatin及eGFP新型腺病毒载体的构建及其表达研究显示文摘目的构建RGD修饰表达绿色荧光蛋白(eGFP)和肿瘤抑素(tumstatin)的新型腺病毒载体。方法PCR扩增tttrnstatin基因,经克隆后构建pAd5CMV/tumstatin穿梭载体。重叠PCR方法将RGD序列插入到Ad5纤维蛋白的HI环中,获得pMfiber-RGD穿梭载体。穿梭载体与腺病毒骨架载体线性化后共转化EcoliBJ5183,构建pAd-RGD-eGFP骨架载体。最后,使用磷酸钙法将pAd5-CMV/tumstatin穿梭载体和pAd-RGD-eGFP骨架载体共转化HEK293细胞。7-10d后收集细胞裂解物得到Ad—RGD-tumstatin/eGFP病毒。将经过修饰的Ad-RGD-tumstatin/eGFP和未修饰的Ad—WT-tumstatin/eGFP病毒分别感染脑胶质瘤U87MG细胞(病毒剂量分别为1、10、100Vp/细胞),通过观察其荧光强度评估其感染效率。以上两种病毒分别感染HeLa细胞,并分别采用RT-PCR及Western blotting检测tumstatin细胞mRNA及培养上清中蛋白的表达水平。结果病毒感染48h后,可观察到修饰后的腺病毒Ad-RGD-tumstatin/eGFP对U87MG细胞的感染效率明显高于未修饰的腺病毒斛WT-tumstatin/eOFP。RT-PCR及Western blotting可检测到感染Ad-RGD-tumstatin/eGFP后的HeLa细胞中tumstatin的转录和表达。结论成功构建经RGD修饰并表达tumstatin和eGFP基因的新型腺病毒载体,为进一步研究turnstatin在低表达柯萨奇一腺病毒受体的肿瘤中的作用奠定了良好基础。 | 齐宗利 王东阳 边晔 赵俊丽 孙晓聪 夏海滨 | 2010 | 解放军医学杂志2010，35，10： | 0 |
| 4 | 可溶性血管内皮细胞生长因子受体1真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达显示文摘背景:研究表明,可溶性血管内皮生长因子受体Flt-1(sflt-1)基因在多种组织中表达,但其在内皮细胞中的表达尚待证实。目的:获取人sflt-1基因,构建sflt-1基因真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1重组质粒,检测其在人脐静脉内皮细胞中的表达。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-05/12在南昌大学第二附属医院分子中心完成。材料:pEGFP-N1真核表达载体为南昌大学第二附属医院分子中心保存,人脐静脉内皮细胞株购至南京基凯生物技术公司。方法:从含有目的基因的质粒克隆模板中,利用酶切的方法获得目的基因,将目的载体进行酶切,纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,PCR鉴定为阳性的克隆,证明目的基因已经定向连入目的载体。再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确的即为构建成功的融合蛋白表达质粒载体。用脂质体法将pEGFP-N1/sflt-1重组质粒转染人脐静脉内皮细胞。主要观察指标:①重组质粒的酶切鉴定结果。②重组质粒的测序鉴定结果。③荧光显微镜及蛋白免疫印迹检测sflt-1基因在人脐静脉内皮细胞中的表达。结果:①对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,与sflt-1基因片段全长2063bp理论值相符,证实pEGFP-N1/sflt-1重组质粒构建成功。②重组质粒送至上海捷瑞生物技术公司进行通测,测序结果证实插入片段序列与理论值完全一致。③荧光显微镜下可见重组质粒转染人脐静脉内皮细胞发绿色荧光,蛋白免疫印迹检测表明sflt-1基因能在人脐静脉内皮细胞中表达。结论:实验成功构建了携带人血管内皮生长因子受体Flt-1的重组pEGFP-N1/sflt-1真核表达质粒,并证实其在人脐静脉内皮细胞中的表达。 | 周仪华 王耀晟 何力鹏 鲍晓明 黄晓 程晓曙 | 2009 | 中国组织工程研究与临床康复2009，13，41： | 0 |
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