| 1 | 稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定显示文摘为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1. 0×109TU/m L;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/m L;牛HSP72慢病毒感染细胞表达HSP72,感染的奶牛乳腺上皮细胞在倒置荧光显微镜下可看到绿色荧光,转染效率可达90%以上;免疫组化结果表明,正常细胞和空载体感染细胞,HSP72呈现低表达,转染携带HSP72目的基因载体细胞,HSP72高表达,呈现颜色较深的棕色; Western Blot方法检测证实与正常转染细胞相比,慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞HSP72表达稍有降低,但无统计学差异,而携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01),与慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞相比,携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01)。成功建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系,可为研究奶牛乳腺炎分子调控机制以及抗性分子药物筛选提供新的理论依据和工作基础。 | 于文慧 展西振 丰艳妮 曹荣峰 姜忠玲 李华涛 田文儒 | 2018 | 华北农学报2018，33，6： | 1 |
| 2 | 特异性敲除内毛细胞肌球蛋白轻链激酶基因对小鼠听功能的影响显示文摘目的建立特异性敲除内毛细胞肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase,MLCK)基因小鼠模型,初步评价敲除该基因对小鼠听功能的影响。方法从DNA水平对Mlck基因敲除小鼠作基因型鉴定并验证敲除效率;以短声和8、16、32kHz短纯音作为刺激音对基因敲除组及对照组小鼠行听性脑干反应(ABR)测试,分析两组小鼠反应阈值及波形差异。结果根据鼠尾DNAPCR结果能够初步判定小鼠基因型,分离内毛细胞提取DNA,PCR结果证实目的基因被剔除。Mlck基因敲除组小鼠短声及短纯音各频率ABR平均阈值较对照组均有升高,差异具有统计学意义(P值均〈0.05);其中高频阈值升高更为显著,在32kHz两组平均阈值相差〉20dB。基因敲除组小鼠16kHz短纯音60、50、40dBSPL声强下Ⅰ波幅值明显小于对照组,差异具有统计学意义(P值均〈0.05)。两组小鼠16kHz短纯音在60dBSPL下的Ⅰ/Ⅱ、Ⅰ/Ⅲ波幅比差异无统计学意义(P值均〉0.05)。结论内毛细胞特异性敲除Mlck小鼠成功将目的基因剔除,敲除后小鼠听力受损,尤以高频明显。 | 朱光洁 马登滨 钱晓云 周函 陈杰 王芳 高下 | 2013 | 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志2013，48，1： | 1 |
| 3 | 长型肌球蛋白轻链激酶4Ig结构域的表达及单克隆抗体的制备显示文摘长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase,L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体.为此,我们先在大肠杆菌E.coliBL21中重组表达了鸡L-MLCK的4Ig蛋白片段(MLCK4Ig),蛋白经纯化后作为抗原免疫小鼠.在小鼠血清中检测到特异性抗体的基础上,建立了2株杂交瘤细胞株,获得抗鸡MLCK4Ig的单克隆抗体.该抗体可以特异与鸡L-MLCK和鸡MLCK4Ig反应.本文并对该抗体的特性及应用进行了讨论.结果表明,我们部分解决了L-MLCK的抗体缺乏问题,为研究L-MLCK及MLCK4Ig片段的功能提供了重要工具. | 吕宁 朱春花 张文程 朱敏生 陈华群 | 2008 | 南京师大学报(自然科学版)2008，31，4： | 0 |
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