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| 1 | HFRS患者血清中HV-RNA的PCR检测及扩增产物的测序分析显示文摘目的 探讨 RT- PCR用于 HFRS临床标本中病毒基因检测的若干影响因素及西安地区近年主要流行汉坦病毒(HV)毒株的分子流行病学特点 .方法 设计合成了两套分别互补于 HV M基因片段和 S基因片段的引物 ,建立了检测HFRS患者临床血清标本中 HV基因的 RT- nested PCR方法 ,并对扩增的部分 HV靶基因进行了测序分析和比较 .结果 119份 HFRS患者血清 (经临床和 IFA确诊 )经用 S基因片段引物的 RT- nested PCR检测 ,阳性率分别为 :6 0 .5 %(<1wk) ,34 .1% (1~ 2 wk) ,4.0 % (2~ 3wk) ,0 % (>3wk ) ,31份 HFRS急性期患者血清用 M基因片段引物的RT- nested PCR检测 ,仅 12份阳性 ,阳性率 40 .0 % .将 PCR扩增的 6个靶基因序列与 76~ 118株 S基因片段相应的核苷酸序列进行分析比较 ,同源性为 87.2 %~ 96 .0 % ;其推导的氨基酸序列与 76~ 118株核衣壳蛋白相应的氨基酸序列比较 ,同源性为 89.0 %~ 96 .0 % .结论 S基因片段引物的PCR扩增效果优于 M基因片段引物 .6份 S基因片段引物扩增产物的测序结果显示 ,西安地区引起 | 潘蕾 白雪帆 黄长形 李光玉 杨为松 傅恩清 | 2000 | 第四军医大学学报2000，21，7： | 9 |
| 2 | 肾综合征出血热患者血清中汉坦病毒的检测及其序列分析显示文摘目的 为了进一步探讨RT -PCR用于HFRS临床标本中病毒基因检测的可行性及陕西西安地区近年主要流行汉坦病毒 (HV)毒株的分子流行病学特点。方法 本研究设计并合成了两套分别互补于HVM基因片段和S基因片段的引物 ,建立了检测HFRS患者临床血清标本中HV基因的RT -nestedPCR方法 ,并对扩增的部分HV靶基因进行了测序分析和比较。结果 119份HFRS病人血清 (经临床和IFA确诊 )经用S基因片段引物的RT -nestedPCR检测 ,阳性率分别为 :6 0 .5 % (<1w) ,34.1% (1~ 2w) ,4% (2~ 3w) ,0 % (>3w) ,31份HFRS急性期病人血清用M基因片段引物的RT -nestedPCR检测 ,仅 12份阳性 ,阳性率 40 %。结论 表明S基因片段引物的扩增效果优于M基因片段引物。 6份S基因片段引物扩增产物的测序结果显示 ,陕西西安地区HFRS感染的主要毒株为汉滩型 ,将PCR扩增的 6个靶基因序列与 76 - 118株S基因片段相应的核苷酸序列进行分析比较 ,同源性为 87.2 %~ 96 .0 % ;其推导的氨基酸序列与 76 - 118株核衣壳蛋白相应的氨基酸序列比较 ,同源性为 89.0 %~ 96 .0 %。 | 潘蕾 白雪帆 黄长形 李光玉 杨为松 傅恩清 | 2001 | 中国人兽共患病杂志2001，17，1： | 6 |
| 3 | 湖北省不同地区汉坦病毒的基因型研究显示文摘目的 对分离自湖北省不同地区的 30株汉坦病毒 (HV)RNAM片段进行分析 ,以了解湖北省不同地区HV的基因特征及基因组功能。方法 参考HV的基因文库软件设计M片段G1 区型特异性引物 ,用适合于湖北省HV分型的逆转录 -半巢式聚合酶链反应 (RT -heminestedPCR) ,并结合限制性内切酶酶切图谱分析 ,对湖北省不同地区分离的 30株HV进行分型、酶切。结果 分离于湖北省不同地区的 30株HV的分型结果为汉滩型 2 1株、汉城型 9株。 2 1株汉滩型靶基因被HinfⅠ、HaeⅢ消化的图形与标准株 76/ 1 1 8株的图形一致 ,未见与H - 1 1 4株相似的图形 ,其中武汉和洪湖各有l株靶基因HaeⅢ消化只见 1个片段 ;应城、江夏、黄陂和麻城各有 1株靶基因HinfⅠ消化有 3个片段。另外 2 1株汉滩型靶基因除前述的应城毒株外均被HincⅡ消化。 9株汉城型靶基因不能被HaeⅢ消化 ;HinfⅠ消化只见 2个片段 ,而EcoRⅠ消化却见 2个片段 ,与R2 2 株消化的图形不一致。结论 湖北省HFRS流行为混合疫区 ;汉城型M片段基因稳定 ,汉滩型M片段基因不稳定 ,且在湖北地区具有一定的地理聚族性。 | 侯炜 杨占秋 杨继江 赵旻 刘汉燕 曲虹 刘东瀛 丁晓华 | 2002 | 中国公共卫生2002，18，6： | 4 |
| 4 | 汉坦病毒基因分型方法的建立及其核苷酸序列特征分析显示文摘目的使用RTnestedPCR分型检测方法及核苷酸序列测定技术,对来源于福建省内HFRS监测点的鼠肺标本及病人血清进行基因分型并对部分标本的核苷酸序列进行分析比较。结果24份阳性鼠肺标本中检出率为95.8%;20份病人血清标本中仅11份扩增阳性,检出率分别为:83%(≤1周),12.5%(>1周)。扩增阳性标本中仅1份RTPCR分型为HTN型,其余均为SEO型,这与核苷酸序列分型结果相一致。结论近年福建省流行的汉坦病毒仍以SEO型为主。核酸序列比较分析发现,福建省内同一地区流行的SEO型汉坦病毒核苷酸的同源性很高,大于99%,而不同地区病毒间核酸序列变异比较大,尤其是永春和松溪这两个地区的毒株差异达到20%左右,可能是SEO型中两个新的亚型。 | 吴守丽 严延生 何似 李世清 | 2005 | 中国人兽共患病杂志2005，21，9： | 4 |
| 5 | 应用煮沸法-半套式-聚合酶链反应快速检测汉坦病毒感染显示文摘应用煮沸法┐半套式┐聚合酶链反应快速检测汉坦病毒感染张斌白雪帆刘安杨为松作者单位:710038西安,第四军医大学唐都医院(张斌、白雪帆、杨为松);西安市儿童医院(刘安)汉坦病毒的早期诊断是肾综合征出血热(HFRS)有效防治的关键。在聚合酶链反应(PC... | 张斌 白雪帆 刘安 杨为松 | 1998 | 中华传染病杂志1998，16，2： | 1 |
| 6 | RT-PCR技术在流行性出血热病毒分型诊断中的应用显示文摘目的 运用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术对流行性出血热 (EHF)病人标本进行研究 ,以建立一项有效的 EHF病毒分型诊断方法。方法 收集发病 10 d以内的早期 EHF病人血浆、外周血单个核细胞 (PBMC)、尿沉淀细胞。采用异硫氰酸胍 -酚 -氯仿一步抽提各种标本的总RNA。两对特异性引物分别互补于汉滩病毒 ( 型 )及汉城病毒 ( 型 ) M基因片段的 G1区。分别在两对引物的正链引导下反转录合成特异性 c DNA,用相应的引物对进行 PCR扩增。产物经琼脂电泳 ,标准分子量对照鉴定。同时以 Vero- E6细胞及鼠脑传代的标准病毒株进行阳性对照 ,以正常人血浆作阴性对照。结果 19例病人的 30份标本均能被 I型或 型引物扩增出特异性产物 ,其中I型阳性 13例 , 型阳性 4例 ,I、 型同时阳性 2例 ,同一病人的不同标本结果一致。结论 标准病毒株 RT- | 张淑玲 郑曲波 曾令兰 | 2000 | 临床内科杂志2000，17，4： | 0 |
| 7 | 煮沸法抽提汉坦病毒RNA方法的建立及初步应用显示文摘肾综合征出血热(Haemorrhagic FeverWith Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属引起的人类急性传染病,早期快速检测汉坦病毒(Hantavirus)是有效诊治的关键,在聚合酶反应(PCR)应用于出血热快诊中,抽提汉坦病毒RNA是十分关键的一步,传统抽提RNA是用异硫氰酸胍裂解法,需经过酚/氯仿抽提及酒精沉淀,操作流程繁琐。我们尝试用煮沸法抽提取汉坦病毒RNA,并对其临床应用进行了分析,现报告如下。 | 张斌 徐昌萍 郭晏海 杨为松 | 1997 | 西南国防医药1997，7，4： | 0 |
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