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| 1 | HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定显示文摘目的:在大肠埃希菌中表达人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)反式激活蛋白(trans activative transcription protein,Tat),为进一步研究可溶性Tat在艾滋病相关卡波氏肉瘤(AIDS-KS)致病过程中的作用提供材料。方法:以本实验室保存的重组质粒pcDNA3.1(+)/Tat101为模板,PCR扩增目的基因Tat。将PCR产物克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-28a(+)-Tat。将重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹鉴定后,通过镍亲和层析柱纯化。纯化后蛋白采用虫荧光素酶报告实验进行功能验证。结果:限制性内切酶酶切和基因测序证实,成功构建了含有Tat基因的重组原核表达质粒。蛋白质印迹结果显示,His融合蛋白在大肠埃希菌中得到正确表达,纯化后获得了相对分子质量为18×103的融合蛋白。虫荧光素酶报告实验证实,Tat与HIV-1长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)具有结合能力。结论:重组质粒pET-28a(+)-Tat能在大肠埃希菌BL21(DE3)中稳定表达Tat蛋白,镍亲和层析柱纯化的His-Tat融合蛋白具有生物学功能。 | 邱会平 程晓东 卢春 | 2013 | 江苏大学学报(医学版)2013，23，4： | 2 |
| 2 | HIV-1 Vpr促进Vif和APOBEC3G蛋白表达的研究显示文摘目的观察人获得性免疫缺陷病毒蛋白Vpr对Vif蛋白和APOBEC3G蛋白表达水平的影响。方法使用电转化法将携带Vif基因的酵母表达载体转化到裂殖酵母中,使用脂质体转染法将表达Vif蛋白、APOBEC3G蛋白的哺乳动物表达载体转染到可诱导稳定表达Vpr蛋白的哺乳动物HEK293细胞中;使用Western Blot方法检测目标蛋白表达水平的变化。结果在裂殖酵母和哺乳动物细胞中,Vpr蛋白的表达能够提高细胞内的Vif蛋白的表达水平,在哺乳动物细胞中,Vpr蛋白对APOBEC3G蛋白的表达亦有促进作用,Vpr蛋白引起的Vif蛋白量的提高并没有导致APOBEC3G蛋白的减少。结论Vpr蛋白具有调节细胞内蛋白表达的功能。 | 李林 梁栋 李敬云 赵玉琪 | 2008 | 中华实验和临床病毒学杂志2008，22，1： | 1 |
| 3 | Premature Stop Codon at Residue 101 within HIV-1 Rev Does Not Influence Viral Replication of Clade BC but Severely Reduces Viral Fitness of Clade B显示文摘HIV-1 Rev is an accessory protein that plays a key role in nuclear exportation,stabilization,and translation of the viral mRNAs.Rev of HIV-1 clade BC often shows a truncation of 16 AAs due to a premature stop codon at residue 101.This stop codon presents the highest frequency in clade BC and the lowest frequency in clade B.In order to discover the potential biological effect of this truncation on Rev activity and virus replication of clade BC,we constructed Rev expression vectors of clade BC with or without 16 AAs within C-terminal separately,and replaced the stop codon by Q in a CRF07_BC infectious clone.We found that 16 AAs truncation had no effect on expression and activity of Rev in clade BC.Also,the mutation from the stop codon to Q had no effect on virus replication of clade BC.Next,to investigate the effect of this truncation on Rev activity and replication capacity of clade B,Rev expression vectors of clade B carrying or lacking 16 AAs in C-terminal were constructed respectively,and residue Q at position 101 within Rev was substituted by the stop codon in a clade B infectious clone.It was found that 16 AAs truncation significantly down-regulated Rev expression and impaired clade B Rev activity.Furthermore,a Q-to-stop codon substitution within Rev significantly reduced viral replication fitness of clade B.These results indicate that the premature stop codon at residue 101 within Rev exerts diverse impact on viral replication among different HIV-1 clades. | Zheng Wang Xiaolin Ji Yanling Hao Kunxue Hong Liying Ma Dan Li Yiming Shao | 2020 | Virologica Sinica2020，35，2： | 1 |
| 4 | APOBEC3G蛋白的原核表达及纯化显示文摘目的:原核表达重组APOBEC3G蛋白,为其功能及免疫原性研究奠定基础。方法:提取H9细胞全细胞基因组RNA,通过RT-PCR获得目的基因,经纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,并对表达条件和纯化条件进行优化;利用WesternBlot分析鉴定目的蛋白。结果:构建了APOBEC3G蛋白的原核表达载体Apo-His-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以可溶性蛋白形式存在;经Ni-NTA亲和层析柱一步纯化,获得了高纯度的重组APOBEC3G蛋白,蛋白浓度可达1.2mg/mL;WesternBlot显示获得了目的蛋白。结论:在原核表达系统中表达、纯化了可溶性APOBEC3G蛋白,为进一步对其进行免疫原性和功能研究奠定了基础。 | 隋洪帅 李林 鲍作义 李敬云 | 2008 | 生物技术通讯2008，19，2： | 0 |
| 5 | HIV-1辅助蛋白与病毒复制显示文摘 | 孟哲峰 邵一鸣 | 2008 | 中国艾滋病性病2008，14，3： | 0 |
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