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| 1 | 人源基因载体pHrn介导p53基因在Bel-7402中的抗癌研究(英文)显示文摘利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动子hTERTp组合,分别结合GFP及精氨酸型和脯氨酸型肿瘤抑制基因p53,构建GFP表达载体pchEGFP以及p53表达载体pchp53Arg和pchp53Pro;脂质体2000转染肝癌细胞株Bel-7402;24h后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达;RT-PCR、蛋白质印迹检测p53基因的表达;利用Hoechst33258、Annexin V/PI染色,检测p53促使肿瘤细胞的促凋亡情况.结果表明:GFP荧光表达载体在Bel-7402细胞中能有效表达;RT-PCR及蛋白质印迹检测到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402细胞内表达;Hoechst33258染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞凋亡结果.结果表明:实验所构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞Bel-7402能有表达,并能形成外源性p53蛋白,但没有检测到明显的p53促使肝癌细胞调亡的结果.这可能与p53对hTERT的负调控作用有关. | 薛志刚 李剑 尹彪 张雅坤 刘雄昊 潘乾 龙志高 戴和平 夏昆 邬玲仟 梁德生 夏家辉 | 2007 | 生物化学与生物物理进展2007，34，5： | 2 |
| 2 | A non-viral vector for potential DMD gene therapy study by targeting a minidystrophin-GFP fusion gene into the hrDNA locus显示文摘基因治疗为 Duchenne 肌肉发达的营养障碍(DMD ) 的致命的混乱作为一条有希望的途径出现了。用一个新奇非病毒的交货系统,指向向量的人的 ribosomal DNA (hrDNA ) ,我们与 10 的高地点特定的综合效率指向了 minidystrophin-GFP 熔化基因进 HT1080 房间的 hrDNA 地点 ? 5,在里面 transgene 能高效地并且连续地表示它。minidystrophin-GFP 熔化蛋白质容易被发现在 HT1080 房间的血浆膜上本地化,显示它的可能的生理的表演。我们的调查结果证明指向 hrDNA 向量可能为 DMD 基因治疗学习是高度有用的。 | Junlin Yang Xionghao Liu Jiaoling Yu Liang Sheng Yan Shi Zhuo Li Youjin Hu Jinfeng Xu Lingqian Wu Yu Liang Jiahui Xia Desheng Liang | 2009 | Acta Biochimica et Biophysica Sinica2009，41，12： | 1 |
| 3 | 人核糖体DNA打靶载体介导mda-7基因对肝癌的体外基因治疗研究(英文)显示文摘人核糖体DNA打靶载体pHr是一种由中南大学医学遗传学国家重点实验室开发构建的针对人类基因组的同源重组质粒载体.利用pHr构建了一种mda-7/GFP融合基因的人源基因表达载体pHr-CMG,并研究了其在肝癌细胞系Bel-7402中的作用.利用荧光显微镜、RT-PCR和Western blotting检测了mda-7/GFP融合基因的表达;利用细胞周期分析、MTT和Hoechst33258染色研究了其在细胞中的作用.结果显示,pHr-CMG载体能在Bel-7402细胞中有效表达MDA-7/GFP融合蛋白,进而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,推测其可能是由载体表达了mda-7基因引起细胞在G2/M期累积所导致的.同时,实验结果证实了人核糖体DNA打靶载体系统以及pHr-CMG表达载体的有效性,为其在进一步基因治疗研究中的应用提供了理论和实验基础. | 薛金锋 刘雄昊 何嫱 薛志刚 胡友金 李卓 杨俊林 高庭 潘乾 龙志高 邬玲仟 夏昆 梁德生 夏家辉 | 2009 | 生物化学与生物物理进展2009，36，11： | 1 |
| 4 | 核糖体基因区打靶载体电转染肝细胞的孵育条件的优化显示文摘目的:提高核糖体基因区打靶载体的转染效率,优化其电转染肝细胞的孵育条件。方法:在其它电转染参数一致的前提下,设计了6组不同的孵育条件,通过分析转染后细胞活率以及48h后目的基因GFP的表达效率,来比较多组不同的孵育条件对电转染效率的影响。结果:6组条件中,转染前21℃,1min,转染后21℃,1min孵育,得到的转染效率最优,比其它的条件得到的转染效率高50%。结论:孵育条件的优化能提高为核糖体基因区靶向表达载体在体外电转染肝细胞的转染效率。 | 曹善仁 刘慕君 刘雄昊 伍汇慧 邬玲仟 梁德生 | 2010 | 现代生物医学进展2010，10，13： | 0 |
| 5 | 核定位信号肽提高核糖体区打靶载体转染效率的研究(英文)显示文摘核糖体区打靶载体(10~14kb)是中南大学医学遗传学国家重点实验室构建的一种具有定点整合能力的非病毒载体,具有安全性好及长期稳定表达的特点,但是较低的转染率成为其应用于临床的主要障碍.核定位信号肽可以促进非病毒载体进入细胞核,从而提高其转染效率.但是核定位信号肽提高外源基因表达的能力却严重受到其与DNA偶联方式及偶联剂的影响.采用偶联剂SPB可以通过静电作用将核糖体区打靶载体与SV40核定位信号肽有效结合,并且可以防止其被DNase降解.应用聚乙烯亚胺转染人原代皮肤成纤维细胞后,激光共聚焦显微镜观察显示,核定位信号肽可以在60min内携带12kb的质粒DNA进入细胞核.转染后48h,流式细胞仪检测GFP表达,结果显示转染率提高了4~5倍.聚乙烯亚胺是一种毒性小,而且价格低廉的高分子转染试剂,广泛被应用于体内基因治疗的研究中,上述研究将会促进核糖体区打靶载体在临床基因治疗中的应用. | 石岩 刘雄昊 梁德生 冯劢 邬玲仟 杨俊林 李卓 赵凯 潘乾 龙志高 夏家辉 | 2009 | 生物化学与生物物理进展2009，36，10： | 0 |
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