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| 1 | 活体电穿孔法辅助核酸免疫制备小鼠抗棉铃虫精氨酸激酶的抗体显示文摘目的利用活体电穿孔法将携带有棉铃虫精氨酸激酶(HarmAK)基因的表达质粒导入昆明小白鼠制备抗体。方法在构建重组质粒pcDNA3-HarmAK并测序验证序列的正确性后,利用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法将重组质粒pcDNA3-HarmAK导入到小鼠体内,免疫5次后,用ELISA检测确定抗体的效价,并对抗体的特异性进行Western blot法检测。结果小鼠抗HarmAK血清的效价达到1∶40 000,Western blot法检测的结果显示此抗血清能与融合蛋白His-HarmAK和棉铃虫总蛋白中的AK蛋白特异性结合。结论采用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法制备了高滴度和特异性的小鼠抗HarmAK的抗体。 | 赵洁 赵文博 朱燕 张富春 马纪 黄丽娜 刘小宁 | 2014 | 细胞与分子免疫学杂志2014，30，10： | 3 |
| 2 | 洛氏脊漠甲抗冻蛋白基因的克隆、表达和功能检测显示文摘为了研究抗冻蛋白基因是否在新疆荒漠昆虫洛氏脊漠甲Pterocomaloczyi中存在,利用RT-PCR技术克隆获得了洛氏脊漠甲抗冻蛋白的cDNA片段,命名为Plafp743。测序结果表明洛氏脊漠甲Plafp743所编码的蛋白质由94个氨基酸组成,蛋白序列呈现规则结构CTX1X2X3X4CX5X6X7X8X9。利用原核表达载体构建重组质粒pGEX-4T-1-Plafp743,转化Escherichia coliBL21进行融合蛋白表达,SDS-PAGE结果表明抗冻蛋白PLAFP基因以可溶性融合蛋白形式表达,相对分子质量36kD。用Glutathione Sepharose4B亲和柱对表达蛋白进行纯化后,通过赤翅甲Dendroidescanadensis抗冻蛋白的小鼠抗血清进行Western blot分析,结果表明纯化的GST-PLAFP融合蛋白与赤翅甲抗血清能够发生特异性的免疫反应。大肠杆菌的低温抗冻保护实验结果证明,30μg/mL的GST-PLAFP在-6℃对细菌具有显著的保护作用,且随着抗冻蛋白浓度的增加,抗冻保护作用的效果也随之增加。本研究首次报道了从荒漠昆虫洛氏脊漠甲扩增得到抗冻蛋白基因,提示抗冻蛋白可能是荒漠昆虫普遍采取的过冬生存策略,为进一步开发利用昆虫抗冻蛋白奠定了基础。 | 马纪 王芸 刘忠渊 张富春 | 2008 | 昆虫学报2008，51，5： | 2 |
| 3 | 拟步甲科昆虫不同抗冻蛋白的免疫交叉性分析显示文摘目的利用甲虫小胸鳖甲的抗冻蛋白MpAFP698制备抗血清,分析拟步甲科不同种类昆虫抗冻蛋白的免疫同源性。方法通过DNA疫苗初次免疫-蛋白质加强的策略免疫新西兰大白兔,先以重组质粒pcDNA3-Mpafp698作为DNA疫苗免疫接种2次,再以融合蛋白His-MpAFP698进行蛋白质加强免疫2次。采用ELISA检测MpAFP698抗体的效价,Western blot法检测抗体的特异性及不同昆虫抗冻蛋白与MpAFP698抗体的免疫交叉反应。结果兔抗血清的效价可达1:40万,Western blot结果显示抗血清分别与His-MpAFP698及GST-MpAFP698蛋白有特异性结合,与小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP149、MpAFPS77以及来自不同昆虫的抗冻蛋白ApAPAFP914、OcAFP4有特异性结合。结论荒漠地区不同甲虫的抗冻蛋白具有相同的抗原表位,可以发生免疫交叉反应。 | 李洁琼 侯晓娟 王岩 刘小宁 马纪 | 2013 | 细胞与分子免疫学杂志2013，29，9： | 2 |
| 4 | 准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698在真核细胞中的表达与鉴定显示文摘目的:构建真核表达质粒pEGFP-N1-mpafp698,转染人胚肾293T细胞,并表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP698。方法:PCR扩增出mpafp698序列,将其克隆入本室保存的真核表达载体pEGFP-N1中,转染293T细胞;利用RT-PCR、流式细胞仪、免疫荧光、Western印迹检测蛋白表达。结果:构建了真核表达载体pEGFP-N1-mpafp698,在转染后24 h可检测到绿色荧光的表达,而对照组则没有检测到荧光蛋白;Western印迹结果显示表达蛋白的相对分子质量约37 000。结论:为准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白的细胞表达及功能研究奠定了基础。 | 姜敏 于继云 李晨晨 马纪 | 2011 | 生物技术通讯2011，22，2： | 1 |
| 5 | 几种昆虫抗冻蛋白的研究概况显示文摘昆虫抗冻蛋白具有很强的抗冻活性,其结构与其他生物不同。本文分别从结构、基因克隆、抗冻活性等方面对几种昆虫的抗冻蛋白进行综述,并对昆虫抗冻蛋白的发展前景进行了展望。 | 李亚平 刘丽娟 | 2012 | 中华卫生杀虫药械2012，18，5： | 0 |
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