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| 1 | TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞杀伤的体外实验研究显示文摘目的:探讨脂质体介导的TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞的杀伤作用以及所产生的旁观者效应。方法:脂质体介导TK基因体外转染骨肉瘤MG-63细胞,倒置荧光显微镜观察细胞转染是否成功,流式细胞仪检测转染细胞与未转染细胞的转染效率。将未转染的骨肉瘤MG-63细胞分为3组,实验1组用转染TK/GCV的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;实验2组用0.22μm滤器过滤的转染后的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;对照组用培养液培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分别测定各组细胞的生长抑制率及骨肉瘤细胞对TK/GCV系统的敏感性。结果:经TK基因转染的MG-63细胞,倒置荧光显微镜下有大量绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染TK基因的细胞转染效率可达75.5%。6 d后MTT检测结果显示实验1组中各比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比有统计学意义(P<0.05);实验2组中1/10、1/7比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。经TK基因转染的MG-63细胞随GCV浓度增加,细胞凋亡率增加。结论:脂质体介导的TK/GCV系统能够通过旁观者效应抑制骨肉瘤MG-63细胞的生长。 | 张桦栋 吕智 冯毅 刘小丽 侯慧铭 | 2014 | 中国骨伤2014，27，3： | 3 |
| 2 | 缺氧反应元件启动子-反义血管内皮生长因子_(165)cDNA和单纯疱疹病毒1-胸苷激酶基因共表达治疗骨肉瘤的体外研究显示文摘目的探讨缺氧条件下,转基因细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达变化以及单纯疱疹病毒1-胸苷激酶(HSV1-TK)/丙氧鸟苷(GCV)系统对转基因细胞的特异杀伤作用。方法以缺氧诱导因子-1/缺氧反应元件(HIF-1/HRE)基因调节系统为载体,采用 DNA 重组技术构建由 HRE 启动子驱动的含人反义 VEGF_(165) cDNA 全长和 HSV1-TK基因的真核表达质粒,将其稳定转染人骨肉瘤细胞系 MG63。应用 PCR 和 RT-PCR 方法检测 TK 基因的整合及转录;用 MTF 法和混合共培养实验分别检测转基因细胞在缺氧或不缺氧条件下对GCV 的敏感性以及 HSV1-TK/GCV 系统的'旁观者效应';ELISA 法检测细胞在缺氧条件下 VEGF 表达变化;流式细胞仪检测细胞周期改变及电镜观察细胞超微结构变化。结果成功构建了由 HRE 启动子驱动的含反义 VEGF_(165) cDNA 全长和潮霉素磷酸转移酶-单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HyTK)基因的真核表达质粒 pBI-HRE-AsVEGF_(165)-HyTK;得到转基因细胞系 MG63TV;检测到 MG63TV 细胞内 TK 基因的 DNA 和 mRNA。缺氧条件下,转基因细胞存活率与 GCV 浓度呈现剂量依赖性,对 GCV 的敏感性提高了100倍;HSV1-TK/GCV 系统旁观者效应明显增强;肿瘤细胞 VEGF 分泌下降50%。缺氧和 GCV 共同作用使转基因细胞 DNA 合成抑制,细胞周期阻滞于 G_0~G_1期,细胞发生凋亡和坏死。结论利用肿瘤缺氧,HRE 启动子能够实现反义VEGF_(165)对体外培养的肿瘤细胞 VEGF 表达的靶向性抑制作用,并能增强 HSV1-TK/GCV 系统对肿瘤细胞的特异性杀伤作用和旁观者效应。该双基因共表达载体系统为实践联合抗血管生成和自杀基因治疗骨肉瘤提供了实验依据。 | 王燕 乔慧 彭挺生 李扬 张萌 梁惠珍 丘钜世 | 2007 | 中华病理学杂志2007，36，3： | 1 |
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