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1烟曲霉菌热稳定性植酸酶在黑曲霉菌中的分泌性表达显示文摘在先前克隆获得烟曲霉菌植酸酶phyA基因并构建了重组质粒的基础上,将该质粒转化黑曲霉菌pyrG基因缺陷株M54;同时制备植酸酶多克隆抗体用于植酸酶的免疫学检测。SDS-PAGE和western-blot结果表明,phyA在黑曲霉菌中获得分泌性表达。表达产物活性测定结果显示,重组植酸酶的表达量为597.6 IU/mL。在90℃加热10 min和100℃加热20 min后,重组植酸酶残余酶活分别为74%和70%,具有较好的热稳定性。实现了烟曲霉菌植酸酶在黑曲霉菌中的分泌性表达,表达产物具较高的生物活性和耐热性。李佳 刘钟滨 2007微生物学杂志2007,27,3:4
2pEGFP-植酸酶基因质粒重组构建及其在COS7细胞中表达分析显示文摘采用PCR技术扩增细菌酸性植酸aPPA2基因ORF序列,其DNA分子为1 299 bp,编码432氨基酸,蛋白质分子量约为48 kD a。此植酸酶基因被克隆到pEGFP-N3表达载体的BamH1和Pst1克隆区域,重组的pEG-FP-aPPA2重组质粒经转化到哺乳类培养细胞COS7中。重组的pEGFP-N3-aPPA2在COS7细胞中正常表达并检测出高的植酸酶活性。本研究提出的pEGFP-N3-aPPA2重组质粒构建和在哺乳类COS7细胞表达体系为植酸酶生产提供了新的技术线路。刘芳 刘臻 成嘉 符贵红 王欢 黄颖 张建社 2006激光生物学报2006,15,6:2
3植酸酶基因工程菌构建及其生产应用中问题分析显示文摘简要分析了植酸酶的生物学特性以及构建植酸酶基因工程菌和酶生产应用中存在的问题,提出了对植酸酶基因的重组改造、载体表达宿主筛选的方法和途径,以求构建高效表达、高活性和高稳定性的酶基因工程菌,促进酶的生产和应用。张建社 刘明志 刘臻 2006生物技术通报2006,22,5:1
4产植酸酶菌株的筛选及其植酸酶基因的克隆显示文摘从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的烟曲霉菌株WY-2,其植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃。通过对烟曲霉WY-2植酸酶基因进行PCR扩增,获得了一个1.5kb大小的特异性产物,将其克隆到载体pMD18-T中。测序结果分析表明,该基因片段含有植酸酶基因完整的阅读框架(ORF),基因全长1459bp,其中包含一个61bp的内含子,编码465个氨基酸,有7个潜在的糖基化位点,5′端有一编码26个氨基酸的信号肽序列。该基因与已报道的烟曲霉ATCC34625植酸酶基因有91%同源性,编码的氨基酸序列同源性为91%。王严 高晓蓉 苏乔 王静云 安利佳 2007微生物学通报2007,34,4:1
5转基因工程菌的研究及其在农业中的应用显示文摘转基因工程菌的构建是基因工程技术中的一个前言课题,它具有良好的产业化前景。其构建包括最佳表达载体的构建,适宜宿主细胞的选择、转化、筛选鉴定和遗传稳定性鉴定,获得质粒能稳定遗传的、高效表达的转基因工程菌等过程。就转基因工程菌及其所用的载体的构建,大肠杆菌、乳酸杆菌、酵母菌和蓝藻菌等受体菌的选育,外源基因的高效表达及其在农业中的饲料用植酸酶基因工程菌,杀虫微生物农药和根瘤菌基因工程菌应用方面进行了概述,并指出了一些转基因工程菌应用的安全性及不够完善的地方。赵莹 孙哲 娄玉杰 张宏福 2008中国生物工程杂志2008,28,S1:0
6玉米耐热DNA聚合酶基因表达载体构建与花粉介导转化显示文摘实验构建热稳定性聚合酶的基因表达双元载体,利用花粉介导法将热稳定性DNA聚合酶基因导入玉米幼胚,获得耐热转基因玉米株系。用热稳定性DNA聚合酶基因构建表达载体;然后利用花粉介导法进行转化,花粉收集自仲恺自交系玉米甜1号和自交系糯2号,将花粉与构建好的基因表达载体混合,利用花粉介导法进行转化;将收集到的T1代种子用PCR凝胶电泳技术和Southern杂交技术进行检测,选出阳性的转化株;在T2代经过田间耐热压力试验结合测定的玉米生理指标,筛选出9个具有良好耐热性玉米株系。易文斌 庄丽莎 张海 郭泽鑫 林伟锋 赵海婵 张雅君 梁雪莲 2016玉米科学2016,24,1:0
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