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| 1 | Cytotoxic effect and possible mechanisms of Tetracaine on human corneal epithelial cells in vitro显示文摘AIM: To demonstrate the cytotoxic effect and possible mechanisms of Tetracaine on human corneal epithelial(HCEP) cells in vitro.·METHODS: In vitro cultured HCEP cell were treated with Tetracaine hydrochloride at different doses for different times, and their morphology, viability, and plasma membrane permeability were detected by light microscopy, methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay,and acridine orange(AO)/ethidium bromide(EB) staining,respectively. Their cell cycle progression, phosphati-dylserine orientation in plasma membrane, and mitochondrial membrane potential(MTP) were assessed by flow cytometry. DNA fragmentation, ultrastructure,caspase activation, and the cytoplasmic apoptosis inducing factor(AIF) and cytochrome c(Cyt. c) along with the expression of B-cell lymphoma-2(Bcl-2) family proteins were examined by gel electrophoresis,transmission electron microscope, enzyme linked immunosorbent assay(ELISA), and Western blot,respectively.·RESULTS: After exposed to Tetracaine at doses from10.0 to 0.3125 g/L, the HCEP cells showed dose- and time-dependent morphological abnormality and typical cytopathic effect, viability decline, and plasma membrane permeability elevation. Tetracaine induced phosphati-dylserine externalization, DNA fragmentation, G1 phase arrest, and ultrastructural abnormality and apoptotic body formation. Furthermore, Tetracaine at a dose of0.3125 g/L also induced caspase-3,-9 and-8 activation,MTP disruption, up-regulation of the cytoplasmic amount of Cyt. c and AIF, the expressions of Bax and Bad, and down-regulation of the expressions of Bcl-2 and Bcl-x L.·CONCLUSION: Tetracaine above 0.3125 g/L(1/32 of its clinical applied dosage) has a dose- and time-dependent cytotoxicity to HCEP cells in vitro, with inducing cellapoptosis via a death receptor-mediated mitochondriondependent pathway. | Xin Pang Ting-Jun Fan | 2016 | International Journal of Ophthalmology(English edition)2016，9，4： | 3 |
| 2 | 组织工程脱细胞角膜基质联合干细胞诱导分化制备异体角膜移植材料研究显示文摘目的研究脱细胞角膜基质联合干细胞制备异体角膜移植材料的安全性和有效性。方法应用酶-深低温法对猪角膜基质进行处理,制备猪脱细胞角膜基质。采用微注射法注入骨髓间充质干细胞进行共培养,制备异体角膜移植材料,并将其植于角膜病变的新西兰大白兔,评价术后组织工程角膜的系统性功能。结果脱细胞角膜基质的显微结构显示板层结构完整,未见细胞残留。共培养后光镜观察角膜基质细胞可于脱细胞角膜基质内生长,细胞形态具有纤维细胞特征,但分布不够均匀。移植术后,组织工程角膜愈合良好,未见明显的炎症及排斥反应。结论脱细胞角膜基质联合干细胞诱导分化制备异体角膜移植材料具有免疫排斥率低,组织相容性佳的特性。 | 范忠义 樊廷俊 于苗苗 肖卉 张淑琦 魏晓雯 李昂 李晶 | 2017 | 临床军医杂志2017，45，8： | 2 |
| 3 | 3D共培养模型对体外培养兔角膜缘干细胞的影响显示文摘目的探讨三维(three-dimension,3D)共培养模型对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的作用。方法体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(human periodontal stem cell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分为3组,纤维蛋白胶组:将兔LSCs、HPDLSCs、纤维蛋白胶3D共培养;羊膜组:将兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培养;对照组:将兔LSCs、HPDLSCs共培养。共培养5 d后,用倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察兔LSCs的细胞形态,采用免疫荧光染色检测各组兔LSCs阳性标志物p63的表达,并比较各组p63的阳性率。结果共培养5 d后,倒置显微镜、HE染色观察细胞形态,羊膜组、纤维蛋白胶组细胞排列紧密,呈大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致;对照组细胞排列相对稀疏;扫描电镜下观察见纤维蛋白胶组和羊膜组细胞与载体贴附良好。免疫荧光染色显示纤维蛋白胶组、羊膜组和对照组LSCs的p63阳性率分别为(69.93±8.76)%、(78.36±8.56)%和(58.59±8.31)%,三组间总体比较差异有统计学意义(F=9.43,P=0.000)。两两比较中纤维蛋白胶组、羊膜组LSCs的p63阳性率均大于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。纤维蛋白胶组、羊膜组的p63阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以纤维蛋白胶、羊膜作为载体,HPDLSCs作为饲细胞的3D共培养模型有助于体外扩增兔LSCs。 | 周瑛 孙秋萍 蔡岩 高晓唯 | 2019 | 眼科新进展2019，39，4： | 0 |
| 4 | 以聚乙二醇水凝胶膜为载体构建的角膜上皮移植片对LSCD治疗的可行性显示文摘目的探讨聚乙二醇水凝胶膜(PHFs)是否能作为角膜上皮细胞(CECs)体外扩增的载体以及其能否用于角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)的治疗。方法利用癸二酰氯、聚氧乙基甘油醚、聚已酸内酯二醇人工合成PHFs,检测其厚度、透光度和机械拉伸性能。取清洁级新西兰大白兔4只,培养原代角膜缘上皮细胞,荧光显微镜下观察培养细胞中角蛋白标志物AE1/AE3和干细胞标志物p63的表达;将细胞分为阴性对照组、阳性对照组和PHFs+CECs组,其中将阴性对照组细胞直接种植在培养皿底,加入普通细胞培养液,将阳性对照组细胞种植在培养皿后加入含有100μmol/L H_(2)O_(2)的普通细胞培养液,将PHF+CECs组细胞种植在铺有PHFs的培养皿中用普通细胞培养液培养,各组培养24 h。采用MTT和TUNEL染色法分别观察3个组细胞增生和细胞凋亡情况。采用随机数字表法将清洁级新西兰大白兔15只分为对照组、PHFs组和PHFs+CECs组,每组5只。其中对照组造模后不给予任何处置;PHFs组将空PHFs膜置于LSCD实验兔角膜表面;PHFs+CECs组为将CECs传代后种植于PHFs上构建组织工程移植片后将移植片置于LSCD兔模型的角膜表面。采用荧光素染色法检测各组实验兔角膜缺损面积大小并评分;采用苏木精-伊红染色法检测各组实验兔角膜上皮组织学特点。结果PHFs厚度不超过150μm,能承受约6 MPa的拉力,在400~700 nm可见光范围内透过率>99%。角膜缘原代培养的大多数细胞AE1/AE3染色和p63染色阳性。MTT实验结果显示,PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组A_(490)值分别为0.59±0.01、0.65±0.07和0.06±0.04,总体比较差异有统计学意义(F=12.25,P<0.05),其中PHFs+CECs组和阴性对照组A_(490)值明显大于阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。TUNEL检测结果显示,PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组TUNEL阳性细胞率总体比较差异有统计学意义(F=13.45,P<0.05),其中PHFs+CECs组和阴性对照组TUNEL阳性细胞率明显低于阳性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。荧光素染色结果显示,随着术后时间的延长,各组角膜荧光素钠染色评分均降低,对照组、PHFs组和PHFs+CECs组角膜荧光素钠染色评分依次降低。苏木精-伊红染色结果显示,对照组存在较少形状不规则的角膜上皮细胞,PHFs组一些区域出现单层稀疏的角膜上皮细胞;PHFs+CECs组角膜上皮覆盖范围最大,细胞层数增加到3~5层,形态较规则,排列较紧密。结论PHFs韧性强、透光度高且能够体外扩增角膜上皮,适合做角膜上皮移植片,并能促进LSCD兔模型角膜上皮的修复。 | 郭译远 贤惠敏 Shereen Tan Qiang Fu 金鑫 Mark Daniel Greg.G.Qiao 张弘 | 2022 | 中华实验眼科杂志2022，40，12： | 0 |
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