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| 1 | 一株高毒力致病杆菌CB6的鉴定显示文摘从北京郊区果园采集的小卷蛾斯氏线虫 (Steinernemacarpocapsae)肠道内分离到一株具有较强杀虫和抑菌活性的致病杆菌菌株CB6。形态特征及生理生化特征测定结果表明 ,CB6菌株与致病杆菌属 (Xenorhabdus)中的嗜线虫致病杆菌 (X .nematophila)种的特征基本一致。测定了该菌株的 16SrRNA序列并根据 16SrRNA序列构建了系统发育树 ;在系统发育树中 ,CB6菌株与嗜线虫致病杆菌其他 4个菌株形成一个类群 ,序列同源性大于 99%。但CB6菌株的酪氨酸酶、脂酶 (蛋黄 )的产生、核糖产酸等生化特征与嗜线虫致病杆菌种内的其他菌株存在一定的差异 ,且具有更强的杀虫和抑菌活性。因此认为CB6菌株是嗜线虫致病杆菌的一个变种 ,命名为嗜线虫致病杆菌北京变种(X .nematophilavar.pekingensis)。 | 庞在堂 杨怀文 杨秀芬 简恒 刘峥 | 2004 | 微生物学报2004，44，2： | 14 |
| 2 | 嗜线虫致病杆菌HB310菌株杀虫蛋白的纯化及活性鉴定显示文摘嗜线虫致病杆菌XenorhabdusnematophilaHB310是从河北省土壤中筛选出的一株昆虫病原线虫体内分离纯化获得的共生菌,该菌的发酵液对多种昆虫有较高的杀虫活性。利用85%饱和度的硫酸铵盐析分别获得胞内蛋白提取物和上清液中胞外蛋白提取物,生测结果表明这两种蛋白提取物中都含有胃毒素和血腔毒素。通过制备型非变性凝胶电泳对蛋白提取物进行分离和纯化,得到了3种有杀虫活性的毒素蛋白(毒素Ⅰ、毒素Ⅱ和毒素Ⅲ),胞内的毒素蛋白与分泌到胞外上清液中的毒素蛋白是同种蛋白。毒素Ⅰ和毒素Ⅱ对棉铃虫初孵幼虫有明显的胃毒活性,但没有血腔毒性;毒素Ⅲ对大蜡螟幼虫有很强的血腔毒性,LD50为0.18μg头。SDS_PAGE图谱显示毒素Ⅰ和毒素Ⅱ是由多个多肽组成的复合蛋白,而毒素Ⅲ只分离出一条多肽。毒素Ⅱ在50℃处理10min,其杀虫活性没有显著变化;70℃处理10min对毒素Ⅲ杀虫活性没有显著影响。 | 王勤英 南宫自艳 陆秀君 李秀花 李国勋 崔龙 | 2005 | 昆虫学报2005，48，3： | 13 |
| 3 | 昆虫病原线虫共生菌胞内外蛋白的提取及杀虫活性比较显示文摘通过超声波破碎、硫酸铵盐析等方法从10株昆虫病原线虫共生菌的发酵液中分离出各菌株的胞内和胞外蛋白,测定各蛋白样品含量及其对棉铃虫初孵幼虫的生长抑制毒性,并用Native-PAGE和SDS-PAGE对各粗蛋白组分进行初步分析。结果表明有7个菌株的胞内和胞外蛋白对棉铃虫初孵幼虫生长均显示出不同程度的抑制生长活性。其中以嗜线虫致病杆菌3个菌株CB6、All和Bw活性最强,其胞内蛋白的活性分别达97.1%、97.9%、97.2%,胞外蛋白分别达95.8%9、6.3%、88.6%。不同菌株胞内胞外蛋白产量各不相同。电泳图谱表明,不同菌株间及同一菌株胞内胞外蛋白有差异,但近缘菌株相似。 | 杨保军 杨怀文 刘峥 杨秀芬 袁京京 | 2007 | 中国生物防治2007，23，1： | 4 |
| 4 | 高毒力杀虫细菌嗜线虫致病杆菌CB6菌株的培养基优化显示文摘用正交试验法研究了嗜线虫致病杆菌北京变种菌株CB6的营养利用以及培养基成分的改变对产生杀虫活性物质的影响。通过筛选该菌对碳源、氮源以及无机盐的需求,确定了该菌的最佳发酵培养基为(g/L):豆粉40g,蔗糖15g,蛋白胨15g,酵母膏10g,玉米浆5g,NaH2PO41g,NaCl5g,谷氨酸5g。培养液上清液对玉米螟初孵幼虫的体重抑制率为90 81%,比基础培养基的杀虫活性提高了46.5%。 | 杨秀芬 杨怀文 简恒 刘峥 袁京京 | 2004 | 中国生物防治2004，20，2： | 3 |
| 5 | 2株昆虫病原线虫共生菌发酵物杀虫活性研究显示文摘【目的】研究嗜线虫致病杆菌X.nematophilaYL001(YL001菌株)和伯氏致病杆菌X.bovieniiYL002(YL002菌株)发酵物的杀虫活性,为昆虫病原线虫共生菌生物农药的开发和抗虫基因工程研究提供理论依据。【方法】采用注射法、浸液法及小叶碟添加法,分别测定了YL001和YL002菌株发酵无菌滤液,对大蜡螟、粘虫、小菜蛾及棉铃虫的血腔毒性及毒杀、生长抑制和拒食活性,并对其特性进行了初步检测。【结果】YL001和YL002菌株无菌滤液对大蜡螟和粘虫5龄幼虫均具有较高的血腔毒性,用其不同培养时间的无菌滤液处理大蜡螟和粘虫,48 h后大蜡螟的死亡率均为100%,粘虫的死亡率随共生菌培养时间的延长而逐渐降低。YL001和YL002菌株的无菌滤液对小菜蛾3龄幼虫和棉铃虫初孵幼虫的毒杀活性和生长抑制活性均较低,对5龄棉铃虫幼虫的拒食活性也很低,48 h的平均拒食率分别为24.0%和29.0%。2菌株无菌滤液经50℃处理后,对大蜡螟5龄幼虫的血腔毒性无影响;经70℃处理后毒力明显降低。2菌株无菌滤液对蛋白酶较敏感。【结论】YL001和YL002菌株对害虫有较高的血腔毒性,但毒杀、生长抑制及拒食活性较低,其血腔毒素可能主要是蛋白类物质。 | 王永宏 张强 张兴 | 2009 | 西北农林科技大学学报(自然科学版)2009，37，6： | 2 |
| 6 | 伯氏致病杆菌(Xenor habdus bovienii BE)杀虫活性物质的分离和生物测定显示文摘对斯氏线虫(Steinernera feltiae)比利时品系的共生菌伯氏致病杆菌(Xenorhabdus bovienii BE)进行发酵培养,测定结果显示,该菌发酵液对供试昆虫大蜡螟老龄幼虫有很高的血腔毒性。对发酵液硫酸铵盐析和乙酸乙酯抽提物等衍生物进行测定,发现共生菌的杀虫物质主要为胞外和胞内蛋白成分,且胞内粗提蛋白活性明显高于胞外蛋白。对两种粗提蛋白进行Marker分子量范围为(1.43-9.72)×10^4的SDS-PAGE分析,发现胞外粗提蛋白在此分子量范围内没有明显的条带,而胞内粗提蛋白则有较明显的5个条带。研究表明胞内粗提蛋白具有较高的热稳定性,测定的盐析最佳硫酸铵饱和度为80%,此粗提蛋白在24h和48h后对昆虫血腔毒性的LD50值分别为4.7316g/L和1.5715g/L;其在5d后对二龄幼虫的口服LD50为253.7579μg/g。胞内粗提蛋白凝胶过滤后呈现4个峰值,分别对其进行SDS-PAGE分析,只有浓度较大的峰值1和4产生明显条带,分子量分别为6.64×10。和(2.01-2.90)×10^4的2种复合蛋白;分别对它们进行血腔和口服毒性生物活性测定,发现分子量为(2.01-2.90)×10^4的2种复合蛋白杀虫活性高于分子量为6.64×10^4蛋白的杀虫活性,其在24h和48h后对昆虫血腔毒性的LD50分别为0.3772g/L和0.1238g/L,其在5d后对二龄幼虫的口服LD50为93.0021μg/g。 | 段秀峰 林茂松 李红梅 王暄 刘维红 | 2009 | 江苏农业学报2009，25，1： | 1 |
| 7 | 嗜线虫致病杆菌北京变种的型变进程及抗生素相关性质的研究显示文摘嗜线虫致病杆菌是小卷蛾斯氏线虫体内的共生细菌,在实验室条件下延长培养将会出现型态变异,即从野生型的I型细胞变为II型细胞。对嗜线虫致病杆菌北京变种的型变进程进行了研究,结果发现,嗜线虫致病杆菌北京变种I型菌株在LB培养基中培养4 d即有II型菌出现;培养10 d后,II型菌的比例超过50%;培养到22 d时,II型菌在整个NBTA平板中的比例几乎达到95%。然后分别以I型菌株和II型菌株为材料,对其产素能力和抗生素抗性水平进行了比较,结果显示,北京变种II型菌株对枯草芽孢杆菌的抑制水平降低到I型菌的10.08%;2种型态的菌株均对青霉素和氨苄青霉素具有抗性,其中I型菌株的耐受程度高于II型菌株,因此,嗜线虫致病杆菌北京变种2型细胞的产抗生素能力差异与抗生素抗性水平差异之间可能存在相关性。 | 龚永兴 杨怀文 杨秀芬 刘峥 袁京京 | 2007 | 河北农业科学2007，11，2： | 0 |
| 8 | 嗜线虫致病杆菌北京变种基因组文库的构建及抗生素活性克隆的筛选显示文摘 | 龚永兴 杨怀文 杨秀芬 刘峥 袁京京 | 2007 | 中国生物防治2007，23，4： | 0 |
| 9 | 嗜线虫致病杆菌北京变种的抗生素抗性及质粒pLA2917的转化显示文摘用最小抑制浓度法对嗜线虫致病杆菌北京变种野生型菌株的抗生素抗性进行了测定。结果表明,该菌株对氯霉素、新霉素和卡那霉素敏感,而对链霉素、氨苄青霉素和青霉素具有不同程度的抗性。利用滤膜三亲交配的接合转移方法,以嗜线虫致病杆菌北京变种作为受体细菌,在卡那霉素、四环素和氨苄青霉素的选择压力下,筛选得到接合转移子。经过菌落PCR鉴定,证明质粒pLA2917已经成功转移到嗜线虫致病杆菌北京变种细胞内。对昆虫病原线虫共生细菌的质粒转移方法进行了讨论。 | 龚永兴 杨怀文 刘峥 杨秀芬 袁京京 | 2007 | 中国生物防治2007，23，1： | 0 |
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