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| 1 | 端粒酶逆转录酶启动子hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体的构建及鉴定显示文摘目的构建有hTERT/U6嵌合启动子的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)表达载体,并用分子生物学的技术和方法验证其对肝癌细胞SMMC-7721的效应。方法构建siRNA-EGFP-PTZU6+1表达载体,将其转染到稳定表达EGFP的肝癌细胞株7721(EGFP-7721),观察细胞荧光的变化及RT-PCR,Western blot筛选出更有效的siRNA-EGFP-PTZU6+1载体。PCR扩增端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase promoter,hTERT)启动子的核心序列,构建针对EGFP基因的hTERT/U6嵌合启动子siRNA表达载体(EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT),正向和反向插入的hTERT启动子各1个,并将其转染至EGFP-7721细胞中,RT-PCR验证其效应。结果RT-PCR,Western blot结果表明两重组质粒siRNA-EGFP-PTZU6+1转染EGFP-7721细胞后EGFP基因的表达无统计学差异,但与对照组比较均显著抑制了EGFP基因(P<0.01)。而且,RT-PCR结果显示,反向插入的重组质粒EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT与对照组相比显著抑制了EGFP基因的表达(P<0.05)。结论构建的含hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体在肝癌细胞中具有功能活性,为探讨基因的靶向治疗奠定了基础。 | 姜习新 张鹏辉 刘北忠 涂植光 杨毅 刘靳波 | 2008 | 第三军医大学学报2008，30，8： | 1 |
| 2 | 靶向于端粒酶调控区反义RNA腺病毒的构建显示文摘目的:构建靶向于人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)调控区的反义RNA腺病毒。方法:PCR扩增hTERT调控区1779bp的DNA片段,与腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV连接,PCR筛选反向插入的hTERT反义腺病毒穿梭载体pCMV-ashTERT,将pCMV-ashTERT与骨架质粒pAdEasy-1共转染受体菌BJ5183,进行同源重组。用含卡那霉素的LB平板筛选同源重组阳性的克隆,酶切鉴定后,以PacⅠ酶切线性化,转染包装细胞HEK293,在显微镜下观察细胞形态以鉴定重组的腺病毒,并以空斑形成实验测定重组病毒的滴度。结果:成功构建了端粒酶催化亚单位调控区的反义RNA重组腺病毒(pAd-ashTERT),滴度为2.8×1011pfu/ml。结论:成功构建hTERT调控区反义腺病毒,为探讨以端粒酶为靶点的抗肿瘤药物奠定了基础。 | 刘素侠 孙汶生 马春红 石永玉 朱法良 张艳 | 2005 | 山东大学学报(医学版)2005，43，8： | 0 |
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