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| 1 | 四种草莓病毒SMoV、SVBV、SCV、SMYEV多重RT-PCR检测显示文摘我国草莓病毒主要有草莓斑驳病毒(SMoV)、草莓镶脉病毒(SVBV)、草毒皱缩病毒(SCV)和草莓轻型黄边病毒(SMYEV),通常发生混合侵染。本研究针对我国4种草莓病毒的外壳蛋白基因部分序列设计引物,通过优化多重RT-PCR反应条件,建立起能同时检测4种草莓病毒的多重RT-PCR检测体系。应用该体系成功对4种病毒复合侵染的草莓材料进行多重RT-PCR扩增,得到278、394、731和861bp共4条特异性条带。测序结果表明,4种病毒序列与相应的参考序列相似性均达98%以上。对草莓茎尖脱毒和叶片离体再生的试管苗样品进行检测,结果显示,该方法可以同步、快速、特异地检测出受侵染寄主植物中的4种病毒,并且灵敏度高。 | 朱海生 花秀凤 陈敏氡 温庆放 | 2013 | 核农学报2013，27，11： | 32 |
| 2 | 草莓ABA的快速提取方法及超高效液相色谱分析显示文摘采用甲醇︰乙酸乙酯︰甲酸=50︰50︰1的混合液作为提取溶剂,可快速从草莓中提取ABA,整个提取过程可在0.5 h内完成,大大提高了ABA提取效率。建立了一套适合ABA分析的超高效液相色谱分析体系,其流动相为甲醇︰乙腈︰0.1%甲酸=20︰10︰70,流速0.3 mL·min-1,检测波长265 nm,柱温30℃,进样10μL。利用建立的快速提取法及超高效液相色谱分析方法,测定了不同发育阶段草莓果实(青果、白果、粉红果和红果)的ABA含量,发现其呈上升趋势,至红果期ABA含量达到最高。 | 马宏棋 陈敏氡 朱海生 温庆放 | 2014 | 园艺学报2014，41，3： | 10 |
| 3 | 中国南瓜CmHSP70基因的克隆及表达分析显示文摘为了探究中国南瓜(Cucurbita moschata)热激蛋白70基因的功能,该研究采用转录组测序和RT-PCR方法,从中国南瓜中分离获得3个HSP70基因的开放阅读框(ORF)全长,分别命名为CmHSP70-1、CmHSP70-2和CmHSP70-3,三者的序列长度分别为1 998、1 941和2 118 bp,编码666、647和706个氨基酸。蛋白序列分析显示,3个CmHSP70蛋白均属于亲水性蛋白,都含有典型的NBD和SBD保守结构域;CmHSP70-1蛋白含有信号肽和跨膜结构,亚细胞主要定位于内质网;CmHSP70-2蛋白和CmHSP70-3蛋白不含信号肽和跨膜结构,亚细胞主要定位于细胞质和叶绿体。同源比对和进化分析发现,3个CmHSP70蛋白与苦瓜、甜瓜和黄瓜的HSP70蛋白的相似性最高且遗传距离最近。qRT-PCR分析显示,42℃处理能够诱导3个CmHSP70基因在根、茎、嫩叶和成熟叶中表达,并且表达量存在明显的组织特异性,成熟叶中基因的表达量最高;高温条件下,成熟叶中3个CmHSP70基因均能够在短时间内(处理0~2 h)响应热胁迫而大量表达,尤其是CmHSP70-2基因,推测该基因可能在中国南瓜热胁迫过程发挥重要的调节作用。该研究结果为深入了解HSP70基因功能以及阐明中国南瓜的耐热机制提供理论依据。 | 陈敏氡 王彬 朱海生 温庆放 | 2019 | 西北植物学报2019，39，6： | 7 |
| 4 | 草莓半胱氨酸蛋白酶基因(FaCP)的克隆及表达分析显示文摘半胱氨酸蛋白酶作为一种重要的水解蛋白酶,参与植物的许多生理过程。采用RT-PCR和RACE技术从草莓(Fragaria×ananassa)中克隆到半胱氨酸蛋白酶基因FaCP(GenBank登录号:JN979371),该基因cDNA全长1338bp,包含一个1062bp完整的开放阅读框(ORF),编码354氨基酸。生物信息学序列分析表明,FaCP开放阅读框编码的氨基酸序列与其他植物的CP蛋白同源性较高。Real-timePCR分析发现,FaCP基因在草莓果实、叶、根、茎和花萼中都有表达;在果实成熟过程中FaCP表达量逐渐增加,在粉红果最高,红果中略有下降。在草莓叶片中,随着叶片衰老,FaCP基因表达量增加明显。研究结果表明,FaCP可能参与了调控草莓果实的成熟及叶片衰老。 | 朱海生 陈敏氡 温庆放 林珲 | 2013 | 农业生物技术学报2013，21，2： | 6 |
| 5 | 花椰菜游离小孢子培养技术研究进展显示文摘游离小孢子培养已经成为花椰菜现代育种重要的手段之一。它可以缩短育种年限,加快育种进程,降低误选,加快种质资源的创新,游离小孢子培养已逐渐成为花椰菜育种的研究热点。笔者回顾了中国花椰菜的育种历史以及游离小孢子培养情况。着重阐述了影响小孢子培养的主要因素:基因型、生理状况、预处理、小孢子发育时期、培养基及其成分、胚状体的发生和胚培养以及小孢子植株的倍性,并提出相关的问题与展望,以期对花椰菜的育种研究提供参考。 | 林珲 朱海生 陈敏氡 温庆放 | 2014 | 中国农学通报2014，30，13： | 4 |
| 6 | 草莓psy、pds和zds基因融合植物表达载体的构建显示文摘根据草莓psy、pds和zds基因序列,设计含有酶切位点的特异引物,以草莓总RNA为模板,通过RT-PCR法分别克隆psy、pds和zds基因.以植物表达载体pBI121为基础,利用口蹄疫病毒2A序列将psy、pds和zds基因融合在同一个开放阅读框下,构建成三价融合植物双元表达载体pBI2A2Apsy-pds-zds.同时构建了psy和zds基因二价融合植物表达载体pBI2A2Apsy-zds.经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后,成功将2个重组表达质粒pBI2A2Apsy-pds-zds和pBI2A2Apsy-zds导入农杆菌EHA105中. | 朱海生 陈敏氡 温庆放 | 2013 | 福建农林大学学报(自然科学版)2013，42，4： | 3 |
| 7 | 辣椒EST-SSRs标记的通用性研究显示文摘为研究辣椒EST-SSRs标记在主要茄科蔬菜间的通用性,从NCBI数据库下载118 900条辣椒相关EST,对其进行SSR位点搜索,用含SSR位点的辣椒ESTs设计的200对EST-SSRs引物对17份辣椒材料、24份番茄材料、16份茄子材料进行PCR扩增,有效扩增比率分别为98%、94.5%、90.5%,多态性比率分别为35.5%、29.5%、26.5%。多态性引物对辣椒、番茄、茄子的特定亲本及其杂种一代F1的亲缘关系进行检测,均能达到预期效果,试验结果说明从辣椒相关EST数据库中开发的SSR引物在茄科植物中有较好的通用性。 | 李永平 陈敏氡 康建坂 温庆放 | 2017 | 福建农业学报2017，32，7： | 1 |
| 8 | 丝瓜多聚泛素基因(LcUBQ)的克隆及表达分析显示文摘泛素是一种逆境响应蛋白,所介导的泛素/26S蛋白酶体途径在植物适应逆境过程中发挥重要作用。为探究丝瓜(Luffa cylindrica)泛素基因的功能,采用RT-PCR(reverse transcription-PCR)和RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术从丝瓜中克隆到多聚泛素基因(polyubiquitin gene),命名为LcUBQ(Gen Bank登录号:KR349345),该基因cDNA全长1 579 bp,包含一个1 371 bp的完整开放阅读框,编码457个氨基酸组成的蛋白质,预测其分子量和等电点分别为51.26 kDa和7.05,未发现信号肽和跨膜结构,WoLF PSORT预测其亚细胞定位于细胞质,二级结构中α-螺旋、延伸带和无规卷曲各占24.73%、22.54%和52.74%。进化树分析表明,丝瓜LcUBQ蛋白质与黄瓜、甜瓜等葫芦科植物亲缘关系较近。荧光定量PCR分析发现,LcUBQ基因在丝瓜的不同组织皆有表达,其中在根和叶中表达量最低,高温(40°C)、低温(4°C)以及弱光[20μmol/(m^2?s)]均能诱导叶片中LcUBQ基因的高表达,尤其是低温胁迫。低温胁迫下,LcUBQ基因的表达量呈现先升高再下降的趋势,与其对应的泛素水平的变化基本一致,并且无论是低温或弱光处理,LcUBQ基因的表达量及对应的泛素水平均在前2 h增加得最为明显,推测LcUBQ基因可能参与丝瓜的早期胁迫信号转导及低温、弱光胁迫应答过程。 | 陈敏氡 王彬 朱海生 温庆放 | 2018 | 中国细胞生物学学报2018，40，1： | 1 |
| 9 | 草莓叶叶黄素循环组分超高效液相色谱分析显示文摘为建立草莓叶叶黄素循环组分超高效液相色谱(UPLC)的分析方法,优化草莓叶叶黄素循环组分的提取条件,建立适宜的UPLC测定方法,通过研究强光下各组分含量的变化规律进行验证,结果表明,以丙酮为提取剂,不经过皂化直接提取,采用C18色谱柱,以乙腈∶甲醇=9∶1为流动相,流速0.5 m L/min,波长445 nm,柱温30℃能较好地分离及测定草莓叶叶黄素循环各组分,方法快速稳定,检测时间仅需1.2 min。强光下,玉米黄质、叶黄素循环库和脱环氧化程度均明显升高而紫黄质下降,符合叶黄素循环调控规律,证实此方法可靠。可见,实验所建立的UPLC测定方法适合草莓叶叶黄素循环组分分析。 | 陈敏氡 朱海生 王彬 温庆放 | 2016 | 热带作物学报2016，37，9： | 1 |
| 10 | 草莓NCED基因正反义表达载体和RNAi载体的构建显示文摘根据草莓(Fragaria ananassa Duch)NCED基因序列(GenBank:HQ399498),克隆NCED基因开放阅读框,将该片段插入植物表达载体pBI 121的CaMV 35S启动子和NOS终止子之间,构建了正义表达载体pBI 121NCED。克隆NCED基因正义、反义片段和作为内含子的gusA基因片段,以植物表达载体pBI 121为基础,以pCAMBIA2301作为中间载体,通过多次酶切和连接,成功构建了草莓NCED基因RNAi表达载体pBI121NCEDRNAi和反义表达载体pBI 121NCEDF。经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后,成功将pBI121NCED、pBI 121NCEDF和pBI 121NCEDRNA 3个重组表达质粒导入农杆菌EHA105中。研究结果为进一步研究草莓NCED基因的功能奠定了基础。 | 朱海生 陈敏氡 李严曼 温庆放 | 2012 | 热带作物学报2012，33，3： | 1 |
| 11 | 空心菜SRAP-PCR分析体系的建立与优化显示文摘以空心菜为试验材料,利用单因素试验对影响SRAP-PCR反应体系的DNA模板、10×PCR Buffer(含Mg2+)、dNTPs、引物以及TaqDNA聚合酶5个因素进行优化,从而建立适合于空心菜SRAP-PCR分析的反应体系。结果表明:空心菜SRAP-PCR最佳的反应体系(25μL)为:DNA模板80ng、10×PCR Buffer(含Mg2+)2.5mmol·L-1、dNTPs 0.2mmol·L-1、引物0.4μmol·L-1、TaqDNA聚合酶1U。运用所优化的SRAP-PCR分析体系,对'本地空心菜'和'三叉空心菜'2个品种进行SRAP-PCR扩增,扩增结果所获得的电泳谱带清晰明亮,材料间表现出明显的多态性,并且在25对SRAP引物组合中可以筛选出7对多态性高的组合,能明显区分2个空心菜品种。由此可见,本试验所建立的SRAP-PCR体系适用于空心菜的品种鉴定和遗传多样性分析。 | 陈敏氡 朱海生 王彬 温庆放 | 2015 | 福建农业学报2015，30，4： | 1 |
| 12 | 不同草莓品种成熟期类胡萝卜素含量的研究显示文摘以‘福莓1号’、‘法兰地’、‘女峰’、‘红珍珠’和‘红实美’等5个草莓品种为材料,利用超高效液相色谱法(UPLC)研究不同草莓品种果实成熟期类胡萝卜素含量的变化。结果表明,5个草莓品种主要含叶黄素和β-胡萝卜素,不同品种间类胡萝卜素的含量存在差异,‘福莓1号’、‘法兰地’、‘女峰’中类胡萝卜素含量较高,而‘红珍珠’和‘红实美’较低;果实外部的类胡萝卜素含量显著高于中心部位;‘福莓1号’和‘法兰地’中类胡萝卜素的含量随果实成熟而逐渐下降,其中绿果期到白果期以及粉红果期到红果期含量下降最为明显。 | 陈敏氡 朱海生 王彬 温庆放 | 2015 | 福建农业学报2015，30，11： | 0 |
| 13 | 植物干旱胁迫的信号通路及相关转录因子研究进展显示文摘植物对干旱环境的适应是一个复杂的生物学过程,涉及多条信号通路的交叉调控。其中,通过转录因子发挥的调控在植物的抗旱过程中起着至关重要的作用。目前参与植物干旱胁迫反应的转录因子主要有AP2/EREBP、MYB、NAC、bZIP和WRKY等。研究表明,单个转录因子可以激活或抑制大量下游靶基因的转录,而单一的靶基因又受到不同转录因子的调控,转录因子之间的串扰现象在植物干旱调控网络中普遍存在。该文总结了近年来国内外有关植物干旱胁迫响应中涉及的主要信号通路[ABA信号通路、Ca^2+信号通路和促有丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)级联信号通路等],并对以上5种转录因子的结构特点、分类以及它们对干旱胁迫的调控作用进行综述,同时对今后的研究方向进行了展望。 | 王彬 陈敏氡 林亮 叶新如 朱海生 温庆放 | 2020 | 西北植物学报2020，40，10： | 30 |
| 14 | UPLC测定草莓果实中类胡萝卜素含量显示文摘【目的】为了获得适宜进行草莓果实类胡萝卜素各组分定性定量分析的方法,【方法】以成熟草莓果实为材料,通过对不同提取剂、提取方法的筛选,优化草莓果实类胡萝卜素的提取条件;通过确定色谱条件以及重复性、精密度、回收率试验,建立类胡萝卜素超高效液相色谱法标准分析体系。【结果】以丙酮∶石油醚=1∶2作为提取剂,皂化提取草莓果实中类胡萝卜素,同时采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以乙腈∶甲醇=9∶1为流动相,在450 nm下测定是进行草莓果实类胡萝卜素定性定量分析的最佳方法。成熟草莓中能检测到叶黄素、β-隐黄质、β-胡萝卜素,含量依次为:118.5、12.6、99.8μg.kg-1;检测不到番茄红素;检测可以在5 min内完成,比常规方法节约时间70%左右;方法平均回收率达到93.2%,变异系数为1.32%~1.86%。【结论】提取方法和超高效液相色谱法标准分析体系适合草莓果实类胡萝卜素各组分的定性定量分析。 | 陈敏氡 朱海生 温庆放 马宏棋 林义章 | 2013 | 果树学报2013，30，4： | 20 |
| 15 | 果蔬酶促褐变研究进展显示文摘为了研究果蔬酶促褐变的物质条件与发生机制,综述了近年来国内外有关果蔬酶促褐变控制措施的研究,发现酶促褐变主要发生在果蔬采后贮运加工过程中,是酚类物质、酚酶和活性氧共同作用的结果,通过控制氧气含量、减少酚类底物以及抑制酶活性等均可有效地减轻或抑制酶促褐变的发生。由于引起褐变的因素是复杂的,且不同物种的酶促褐变所涉及的主要酶、酚类物质、活性氧代谢等均存在较大差异,因此,利用现代生物技术手段对果蔬酶促褐变发生机制以及褐变调控进行更深入的探索是今后研究的一个方向。 | 王彬 陈敏氡 朱海生 刘建汀 温庆放 | 2016 | 中国农学通报2016，32，28： | 18 |
| 16 | 丝瓜过氧化氢酶基因CAT1的克隆及表达分析显示文摘采用RT-PCR和RACE技术从普通丝瓜果肉中分离到1条长达1 755 bp的cDNA序列,并对其进行序列分析。结果表明,该序列包含1个1 479 bp的开放读码框(ORF);预测编码492个氨基酸,理论分子量为56.98 kD,等电点为7.126;编码的蛋白与黄瓜(Cucumis sativus)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)和萝卜(Raphanus sativus)同源蛋白的相似性均在92%以上,显示其高度的保守性,将基因命名为Lc CAT1,Gen Bank登录号为:KP222260。Wolf Psort预测其亚细胞定位于过氧化物酶体(Peroxisomal)内;Motif Scan分析显示,蛋白氨基酸序列344~352位和54~70位分别为过氧化氢酶近端血红素—配体及血红素活性位点特征序列,推测其属于典型过氧化氢酶类(typical catalase,t CAT)。荧光定量PCR分析显示,Lc CAT1具有组织表达特异性,在普通丝瓜品种‘福丝3号’叶片中表达量最高,将近为花、果实、根和茎中表达量的5倍。Lc CAT1在所选的6个丝瓜品种的果肉中呈差异表达,普通丝瓜中的表达量均高于有棱丝瓜;在普通丝瓜品种‘福丝3号’鲜切及采后储藏褐变过程中随时间增加而呈现上调表达趋势,且与其酶活性的变化趋势基本一致。Lc CAT1可能在丝瓜果肉褐变产生过程中发挥着一定的调控作用。 | 温庆放 刘建汀 朱海生 陈敏氡 王彬 张前荣 | 2016 | 园艺学报2016，43，10： | 17 |
| 17 | 花椰菜转录组SSR位点分析及其分子标记开发显示文摘【目的】开发适合花椰菜的SSR分子标记,为花椰菜品种遗传关系鉴定、遗传图谱绘制等提供候选标记。【方法】以24份花椰菜材料为研究对象,通过MISA软件对其转录组SSR位点信息进行分析,设计SSR引物,对这些引物进行PCR扩增,开发高多态性花椰菜的SSR分子标记;利用差异条带对不同花椰菜材料的亲缘关系进行分析。【结果】从转录组数据中得到66 450条Unigene基因,包含10 715个SSR位点,发生频率为12.09%,平均分布距离为5.9kb。SSR位点中优势类型为二核苷酸重复基序,出现频率占总SSR的51.16%;其次是三核苷酸,占总SSR的47.37%。重复序列基序共49种,其中出现频率较高的重复基序主要为AG/CT、GA/TC和AAG/CTT。有1 164个长度≥20bp的SSR位点,获得具有潜在高多态性的SSR引物6 119对。随机设计的40对引物中有31对引物能进行有效扩增,其中有17对引物在24份花椰菜品种中表现出多态性。UPGMA分析显示,在遗传距离为0.625时,17对多态性引物可将24份花椰菜分为3类。【结论】开发的花椰菜SSR标记类型丰富,出现频率高,具有较高的可用性。 | 林珲 李永平 薛珠政 陈敏氡 朱海生 温庆放 | 2019 | 西北农林科技大学学报(自然科学版)2019，47，3： | 14 |
| 18 | ABA对草莓果实成熟和软化的调节显示文摘以‘法兰地’草莓为试材,研究草莓果实生长发育过程中内源脱落酸(ABA)含量、FaNCED基因表达量的变化以及外源ABA、去甲二氢愈创木酸(NDGA)和乙烯利处理对果实成熟软化的影响。结果表明:在草莓果实成熟过程中ABA含量和FaNCED表达量出现2次高峰,分别是花后35d(转色期)和花后45d(果实完熟期)。外源ABA促进FaNCED基因的表达及ABA的积累,促进草莓果实的成熟和后熟软化,NDGA处理表现出相反效果,喷施乙烯利表现不明显,推测ABA在草莓果实成熟和后熟软化中可能起着重要作用。 | 朱海生 温庆放 李永平 林珲 陈敏氡 李严曼 | 2012 | 福建农业学报2012，27，4： | 13 |
| 19 | 利用黄秋葵转录组信息挖掘SSR标记及用于种质分析显示文摘通过对黄秋葵(Hibiscus esculentus L.)转录组信息分析,共获得74 600条unigene,全部序列有52 976 011 bp;有3 191条unigene包含SSR的序列,从中鉴定出3 448个SSR位点,其中有235条序列包含1个以上SSR,复合SSR有123个。优势重复基序为三核苷酸和二核苷酸,分别占总SSR的60.79%和21.43%。二核苷酸重复基元中以AG/CT为优势重复基元,占总位点的11.02%,三核苷酸重复基元以AGA/TCT为主,占总位点的19.61%。利用Primer 3.0共设计出8 088对SSR引物。从87对有效扩增引物中随机选择60对用于32份黄秋葵种质的多态性验证分析,其中36对(占60%)引物表现稳定可重复的多态性。利用UPGMA作图,将32份供试材料分为2类。利用黄秋葵转录组数据进行SSR标记开发,能获得较高频率的SSR位点,且类型丰富,为其遗传多样性分析和遗传图谱构建提供更丰富可靠的标记选择。 | 李永平 刘建汀 陈敏氡 张前荣 朱海生 温庆放 | 2018 | 园艺学报2018，45，3： | 13 |
| 20 | 超高效液相色谱法分析丝瓜酚类物质组分及其含量显示文摘建立超高效液相色谱快速测定丝瓜中酚类物质组分及其含量的方法,为丝瓜酶促褐变的后续研究提供技术支持。液相色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为甲醇(A)/0.3%乙酸水溶液(B),柱温32℃,进样量2μL,流速为0.25 m L·min^(-1)。采用梯度洗脱,洗脱程序0~0.5 min,95%B;0.5~17.5 min,95%~67.5%B;17.5~18 min,67.5%~95%B。检测波长选取283 nm。14种酚类化合物标准品在18 min内完全分离,样品中检测出13种酚酸。线性范围在0.05~4mg·L-1,检出限(S/N=3)为0.004~0.049 mg·L^(-1),决定系数均大于0.999,精密度、重复性、稳定性相对标准偏差均小于5%。平均回收率在95.70%~106.89%,相对标准偏差在0.32%~4.71%。龙胆酸为丝瓜样品中主要酚酸,其次是绿原酸、多巴胺、L–酪氨酸,再次是焦性没食子酸、原儿茶酸、香草酸、儿茶酚、表儿茶酸、对羟基苯甲酸、丁香酸、4–甲基儿茶酚、对香豆酸。 | 温文旭 朱海生 温庆放 陈敏氡 林碧英 薛珠政 | 2016 | 园艺学报2016，43，7： | 12 |
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