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| 1 | PBL教学在基础医学免疫与感染模块教学中的实施及效果评价显示文摘PBL教学法是以问题为基础的教学方法,是我国医学教育模式改革的方向之一。本文对本校免疫与感染模块实施PBL教学情况进行总结;调查结果表明,PBL教学法得到大多数学生的认可,并可显著提高学生理论课成绩;但是学生对传统讲授式教学方式依赖度较高,学生认知水平是影响PBL教学的主要因素。本研究为在基础医学课程中实施PBL教学提供了有益的借鉴。 | 柏银兰 柴春雨 吕欣 王丽梅 康健 吴兴安 张芳琳 徐志凯 | 2015 | 中国病原生物学杂志2015，10，9： | 21 |
| 2 | 结核分泌蛋白MPT64用于101例结核病快速诊断的研究显示文摘目的:比较痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测,评价MPT64蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法:对101例结核病患者进行分析,同时进行痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测,对结果进行比较对照分析。结果:痰检阳性率20.8%,结明试验45.5%,PPD试验77.2%,PPD抗体79.2%,MPT64抗体74.2%;在肺结核患者,MPT64抗体与PPD试验一致率为75.6%;在胸膜炎患者,MPT抗体检测特异性高达86.7%。结论:PPD试验仍是目前结核病早期诊断与鉴别诊断的重要方法,分泌蛋白MPT64可作为新型结核病快速诊断试剂的组分。 | 段艳 柏银兰 薛莹 徐志凯 樊爱琳 高辉 王丽梅 | 2007 | 实用诊断与治疗杂志2007，21，4： | 15 |
| 3 | 医学院校青年教师指导本科生课外科研遇到的问题及解决对策显示文摘高等医学院校开展的本科生课外科研训练,是促使学生由学习向发现进行转化的直接途径,是使学生能够适应现代化并面向未来的需要。本文从学生和教师两个角度,对医学院校青年教师指导本科生课外科研过程中出现的若干问题进行了分析,包括学生科研观念问题、学生实验技能问题、学生探索独立性问题、青年教师引导方向问题、青年教师自身工作安排问题等。同时提出了相应问题的解决对策,包括引导学生正确科研观念形成、做好学生实验操作培训工作、培养学生科研独立性、建立学生良好科研思维、安排好教师自身各项工作等方面,使青年教师能够在培养本科生科研综合能力的过程中发挥更大的作用。 | 路延之 柏银兰 王丽梅 康健 吴兴安 | 2017 | 中国医药导报2017，14，4： | 15 |
| 4 | 在微生物学教学中激发学习动机,提高教学效果显示文摘心理学认为:人的行为受动机驱使.动机是人们活动的一种动因或力量,包括个人的意图、愿望、心理的冲动,或企图达到的目标等.动机具有唤醒和指向的功能.要进行长期的有效的学习,动机是不可少的.学习动机是在社会生活条件和教育的影响下逐渐形成起来的,因此不同的社会和教育对学生的学习有着不同的要求.在实际教学过程中,教师要根据不同的授课对象,采取合适的教学手段,最大限度地激发学生的学习动机,以达到良好的教学效果[1]. | 柏银兰 薛莹 柴春雨 | 2003 | 山西医科大学学报(基础医学教育版)2003，5，6： | 15 |
| 5 | 结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠免疫应答及其保护力显示文摘目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。末次免疫后,取部分免疫小鼠脾淋巴细胞,体外用ESAT6-CFP10融合蛋白刺激后,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖反应,同时检测免疫小鼠IFN-γ和IL-2水平及脾细胞杀伤效应。另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后计数脾脏中的细菌数。结果:ESAT6-CFP10融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶6400。淋巴细胞刺激增殖指数为1.90±0.15,明显高于生理盐水组(0.90±0.15);IFN-γ和IL-2的含量分别为1.792±19ng/L和0.211±11ng/L,显著高于生理盐水对照组,但不及BCG免疫组;同时融合蛋白诱导的脾细胞杀伤率为36%。与生理盐水免疫组(细菌负荷6.51±0.13)相比较,融和蛋白免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后MTB在脾脏中增殖有显著作用(细菌负荷为5.24±0.15,P<0.05),但与BCG免疫组相比脾脏中细菌负荷减少甚微。结论:ESAT6-CFP10融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分。 | 张海 师长宏 薛莹 柏银兰 王丽梅 徐志凯 | 2006 | 细胞与分子免疫学杂志2006，22，4： | 12 |
| 6 | 结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力显示文摘目的 :研究Ag85B与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护力 .方法 :采用皮下包埋的方法 ,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠 3次 ,每次间隔 2wk,用MTB培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins,CFP)作为抗原 ,ELASA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度 .为了检测融合蛋白免疫小鼠引起的细胞免疫应答 ,最后一次免疫完成后 4wk ,取一部分免疫小鼠分离脾淋巴细胞 ,体外用抗原刺激 ,MTT法检测淋巴细胞刺激反应 ,ELISA检测悬液中IFN γ水平 .另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv ,4wk后计数脾脏细菌负荷数 .结果 :Ag85B ESAT6蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶10 0 0 ,ESAT6 Ag85B蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶5 0 0 0 .融合蛋白Ag85B ESAT6和ESAT6 Ag85B免疫组淋巴细胞刺增殖指数分别为 2 .4 0± 0 .17和 2 .6 0± 0 .2 5 ,而生理盐水组只有 0 .90± 0 .2 1;相对应的IFN γ含量分别为 (3.5 1± 0 .30 ) μg/L和 (4 .0 5± 0 .4 1) μg/L ,显著高与生理盐水对照组 (0 .5 0± 0 .2 5 ) μg/L ,P <0 .0 5 ,但不及BCG免疫组 (5 .5 5±0 .31) μg/L .与生理盐水免疫组 (细菌负荷6 .31± 0 .13)相比较 ,融合蛋白免疫的BALB/c小鼠 。 | 师长宏 范雄林 柏银兰 薛莹 张海 徐志凯 | 2004 | 第四军医大学学报2004，25，18： | 11 |
| 7 | 案例教学法在全科医学教学中的应用及其探讨显示文摘案例教学法(CTM)是教学方法改革的方向之一。构建案例教学和传统讲授式结合的教学形式,并在全科医学专业医学基础教育中进行了实践。对学员的调查结果显示,CTM可显著提高学习兴趣,促进学员的学习。对案例教学法的实施对象、范围、实施条件及与其他教学方法的比较和结合等问题进行了总结,为案例教学法在医学基础教育中的推广和应用提供了实践经验。 | 柏银兰 柴春雨 徐志凯 张芳琳 吴兴安 | 2016 | 继续教育2016，30，3： | 11 |
| 8 | 抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定显示文摘目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb)。方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白。用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力。结果:在变性条件下用Ni2+-NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%。用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpfdomain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽。结论:所获得的抗Rpfdomain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具。 | 樊爱琳 师长宏 苏明权 马静 柏银兰 程晓东 徐志凯 郝晓柯 | 2008 | 细胞与分子免疫学杂志2008，24，5： | 9 |
| 9 | 屋尘螨抗原Derp2基因的克隆和表达显示文摘目的 构建并克隆屋尘螨抗原 Der p2基因 ,在大肠杆菌中初步表达 .方法 根据已发表的 Der p2基因 ,人工设计合成一系列基因片段 ,经单链扩增后连接成完整的 Der p2基因 ;将该基因克隆入表达载体 p Pro EX HTb中 ,测序并进行初步表达 .结果 利用所设计的结构制备了完整的 Der p2基因 ,以大肠杆菌为宿主在 IPTG的诱导下获得初步表达 ,该外源蛋白 Mr约为 17× 10 3,占总蛋白量的 2 0 % .结论 所构建的 Der | 史皆然 李元 戚好文 李别虎 柏银兰 范雄林 薛莹 | 2002 | 第四军医大学学报2002，23，13： | 9 |
| 10 | PBL在全科医学微生物学教学中的应用显示文摘在进行全科医学专业医学微生物学的教学过程中,在传统教学方式的基础上结合PBL教学模式,根据学生的实际情况开展教学工作,通过提升教师的专业素养,并对现有的教学模式和考核方式进行改革,致力于培养学生的创新思维,使学生的临床实践能力不断提高,培养适应现代社会需求的高等医学教育人才。 | 康健 柏银兰 王丽梅 路延之 张芳琳 吴兴安 | 2018 | 基础医学教育2018，20，5： | 9 |
| 11 | 反转课堂对医学微生物学实验教学的启示显示文摘医学微生物学是一门重要的专业基础课程,实验课教学不仅是对理论知识的巩固,更是培养学生动手操作及创新能力的重要手段。反转课堂的应用,能够激发学生学习热情,使其自主学习能力和创新能力得到更好的发挥。 | 张芳琳 张亮 柏银兰 雷迎峰 吴兴安 吕欣 | 2018 | 基础医学教育2018，20，5： | 9 |
| 12 | 结核分枝杆菌MPT64-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力显示文摘目的:测定MPT64与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力.方法:将MPT64与ESAT6的融合蛋白皮下免疫小鼠3次,每次间隔2wk,ELISA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度.最后一次免疫完成后4wk,分离部分免疫小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测淋巴细胞刺激指数,ELISA检测悬液中IFNγ水平.另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4wk后计数脾脏细菌负荷数.结果:MPT64ESAT6融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度1∶1500,免疫小鼠后淋巴细胞刺激增殖指数为2.23,而生理盐水免疫组只有0.88;脾淋巴细胞悬液中诱发的IFNγ为(4.28±0.27)μg/L,显著高于生理盐水免疫组[(0.48±0.17)μg/L,P<0.05],但不及BCG免疫组[(5.18±0.31)μg/L].与生理盐水免疫组(细菌负荷6.45±0.17)相比较,融合蛋白免疫的小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用,细菌负荷为5.04±0.11,但与BCG免疫组相比脾脏细菌负荷减少甚微(细菌负荷4.38±0.22).结论:MPT64与ESAT6融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分. | 师长宏 安家泽 唐小凤 王晓武 张海 柏银兰 徐志凯 | 2006 | 第四军医大学学报2006，27，9： | 8 |
| 13 | 结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答显示文摘目的研究结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法用表达MPT64的真核表达质粒pcDNA-M免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、流式细胞仪计CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。结果MPT64基因免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖显著,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+细胞和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显。结论MPT64 DNA疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗的组分。 | 柏银兰 薛莹 王丽梅 樊爱琳 张薇 康健 何俊杰 徐志凯 | 2009 | 中国人兽共患病学报2009，25，5： | 8 |
| 14 | 结核分枝杆菌Ag85B基因疫苗免疫保护作用的初步研究显示文摘目的:研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用。方法:以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠。免疫完成6 wk后,用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染。同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞,并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠,立即用105 CFU的MTB毒株经小鼠尾静脉攻击感染。4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷。结果:与生理盐水对照组相比较,pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少,分别为0.645(log10 CFU,P<0.01)和0.839(log10CFU,P<0.001);而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少。经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞,过继免疫的正常BALB/c小鼠,对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用。结论:pTB30s免疫的BALB/c小鼠,对MTB H37 Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫,有望进一步用于结核病的防治研究。 | 范雄林 徐志凯 李元 李别虎 薛莹 柏银兰 白光春 贾向志 | 2003 | 细胞与分子免疫学杂志2003，19，1： | 8 |
| 15 | 分枝杆菌计数方法的比较研究显示文摘目的:建立牡牛分枝杆菌的快速检测方法.方法:采用紫外分光光度计法、测湿重法、平板菌落计数法测定细菌数,建立紫外分光光度计法、测湿重法对平板菌落计数法的标准曲线.结果:建立了紫外分光光度计法和湿重法相对于平板计数法的标准曲线,通过准确度分析表明在细菌含量在每毫升10^5~10^8之间时,两标准曲线线性关系良好.结论:该方法可用于牡牛分枝杆菌的快速计数. | 罗泰来 申亮亮 柏银兰 薛莹 | 2007 | 第四军医大学学报2007，28，4： | 8 |
| 16 | 结核分枝杆菌esat-6基因疫苗的构建和免疫原性的研究显示文摘目的 构建以结核分枝杆菌H3 7Rvesat - 6基因为基础的基因疫苗 ,并研究其免疫原性。方法 采用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切含有esat- 6目的基因的质粒pGEM -Teasy -esat6 ,10 g L-1琼脂糖凝胶电泳回收约 30 0bp大小片段 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3 1的相应酶切位点阳性克隆经酶切鉴定证实。重组表达质粒肌注免疫BALB/c小鼠三次 ,每次间隔 2周 ,ELISA检测小鼠血清中产生抗体的水平。结果 用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定证实目的基因正确插入载体 ,命名为pcDE6 ,重组质粒免疫小鼠体内产生特异性抗体。结论 所构建的重组真核表达质粒pcDE6能引起免疫动物的特异性体液免疫反应 ,应进一步研究其刺激机体的细胞免疫应答 ,以用于结核病 (TB) | 王丽梅 范雄林 师长宏 李元 柏银兰 薛莹 徐志凯 | 2004 | 中国人兽共患病杂志2004，20，5： | 7 |
| 17 | 结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的免疫学特性显示文摘目的 研究原核表达的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85 B的免疫学特性 .方法 用原核表达的 Ag85 B蛋白免疫 BAL B/c小鼠 ,EL ISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果 .分离免疫小鼠的脾淋巴细胞 ,体外用抗原再刺激 ,MTT方法检测 IFN- γ产生水平和 MTT法检测淋巴细胞增殖 .结果 Ag85 B免疫小鼠可引起较高水平的特异性抗体应答 ,免疫小鼠的脾淋巴细胞体外用抗原再刺激 ,淋巴细胞的增殖较显著 . MTT方法检测 Ag85 B免疫小鼠的 IFN-γ量为 96 0pg· L- 1 ,而生理盐水对照组的量低于 80 pg· L- 1 .结论 Ag85 | 薛莹 李元 史皆然 师长宏 李别虎 范雄林 柏银兰 马文煜 | 2002 | 第四军医大学学报2002，23，13： | 7 |
| 18 | 结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B-ESAT6的融合表达及纯化显示文摘目的 融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法 设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与PGEM T easy载体连接测序。将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入PPROEXHT表达载体 ,挑选出阳性克隆 ,将诱导的表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,同时与含6个组氨酸 (histidine 6×his)的单克隆抗体 (monoclonalantibody ,mAb)进行固定化蛋白质免疫学测定(Western blot) ,将用含Ni+鳌合剂的Ni NTA亲合柱纯化的表达产物免疫小鼠 ,用结核分枝杆菌培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins ,CFP)作为抗原 ,酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。结果 PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与基因文库 (GenBank)报道的完全一致。两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物约为 370 0 0 ,与预计大小相吻合。Western blot结果显示 ,在相对分子量约 370 0 0处有表达产物与 6×hismAb特异性结合带。表达产物为包涵体 ,通过Ni NTA纯化系统 ,可得到纯化的目的蛋白。 | 师长宏 范雄林 徐志凯 李元 柏银兰 薛莹 | 2004 | 中华结核和呼吸杂志2004，27，2： | 7 |
| 19 | 结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的克隆、表达与鉴定显示文摘目的 :构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT6 4重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白 .方法 :用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出MPT6 4基因片段 ,插入 pGEM T easy载体中 ,序列测定正确后 ,将其亚克隆到表达载体pProEXHTb中 ,在大肠杆菌DH5α中表达 .结果 :获得结核分枝杆菌MPT6 4成熟蛋白基因 ,经序列测定与GenBank公布的序列完全一致 ;表达蛋白经SDS PAGE分析 ,相对分子质量与文献报道一致 ;重组蛋白经蛋白印迹实验 ,在Mr2 .6× 10 4位置有特异条带 .MPT6 4蛋白在宿主菌中表达量约占菌体总蛋白的 13.5 % .结论 :基因重组表达的融合蛋白有可能作为有效抗原用于结核病的预防疫苗的研制和皮肤免疫诊断试剂的制备 . | 柏银兰 李元 李别虎 薛莹 范雄林 徐志凯 | 2003 | 第四军医大学学报2003，24，1： | 7 |
| 20 | 结核分枝杆菌Ag85B-ESAT-6融合蛋白重组耻垢分枝杆菌对小鼠的免疫原性研究显示文摘目的评价表达Mtb Ag85B-ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(Ag85B-ESAT-6-rM.s)在小鼠中的免疫原性。方法6周龄BALB/c小鼠经背部皮下注射1×106 CFU(colony-forming unit,菌落形成单位)的Ag85B-ESAT-6-rM.s,同时设M.s免疫组(10只)、BCG免疫组(10只)、Ag85B-ESAT-6融合蛋白免疫组(10只)和生理盐水组(10只)。接种免疫后1~6周,尾静脉采血,检测小鼠外周血CD4+和CD8+T细胞所占百分比;免疫后6周,MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,innersalt]法检测小鼠脾淋巴细胞增殖和酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测脾淋巴细胞分泌γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)等细胞因子的水平。结果Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠后能够明显刺激小鼠外周血CD4+和CD8+T细胞的产生,其所占百分比[(59.6±1.5)%]明显高于BCG免疫组[(48.8±2.3)%](t=12.252,P<0.05)和原始M.s免疫组[(45.7±1.6)%](t=20.166,P<0.05)。Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖指数(3.23±0.31)与BCG免疫刺激的增殖指数(2.95±0.36)相当(t=1.864,P>0.05),但其诱生IFN-γ的能力[斑点形成细胞(spotforming cells,SFC)][(167.5±36.6)SFC/106]明显高于BCG[(98.5±26.9)SFC/106](t=4.804,P<0.05)。结论Ag85B-ESAT-6融合蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达能够明显提高M.s的免疫原性,并能够刺激小鼠机体产生有利于抗Mtb感染的免疫反应,作为TB新型候选疫苗具有一定的研究前景。 | 王平 王丽梅 张薇 柏银兰 康健 郝彦斐 罗泰来 徐志凯 | 2012 | 中国防痨杂志2012，34，3： | 6 |
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